[发明专利]一株他克莫司单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株他克莫司单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫检测技术领域。一株他克莫司单克隆抗体杂交瘤细胞株ICP2B3，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19172。本发明通过他克莫司肟化合成半抗原，制备了他克莫司完全抗原，将其与等量弗氏佐剂混合乳化完全，通过背部皮下多点注射免疫BALB/c小鼠，选取高效价、低IC₅₀小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合，通过间接竞争酶联免疫法进行筛选，并三次亚克隆，得到此细胞株分泌的单克隆抗体，对他克莫司具有较好的特异性和检测灵敏度（IC₅₀为0.996 ng/mL）。本发明成果可用于建立临床血样中他克莫司含量的免疫检测方法，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株他克莫司单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫检测技术领域。

背景技术

他克莫司（Tacrolimus）是从链霉菌属中分离出的一种大环内酯类免疫抑制剂，属于钙调磷酸酶抑制剂，多用于器官移植以及肾病综合症的临床治疗。他克莫司主要是通过与蛋白FKBP-12结合，形成药物-蛋白复合物，抑制白介素-2（IL-2）的表达，并抑制 T 淋巴细胞的作用。虽然与环孢霉素相比，他克莫司的免疫抑制强度强和临床不良反应少，但仍存在生物利用度较低，影响因素多，以及神经系统毒性、肾毒性、血液毒性等多种不良反应。此外，他克莫司的药物治疗窗狭窄，药代动力学差异大。他克莫司药物浓度低会增加排斥反应风险，浓度过高则易导致不良反应的发生。因此，有必要建立快速、高效的他克莫司的监测方法，以便及时调整用药剂量。

他克莫司含量分析方法有高效液相色谱法(HPLC)、液质联用 (LC-MS)等仪器方法，这些检测方法具有耗时、步骤繁琐、无法进行现场快速检测、成本高等缺点，因此建立快速简便的他克莫司检测方法具有重要意义。酶联免疫法（ELISA）是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，适用于大量样本的现场快速检测，为他克莫司检测提供了一种新的检测途径。

发明内容

本发明的目的是克服上述不足之处，提供一株他克莫司单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用。

本发明的第一个目的是提供一株他克莫司单克隆抗体杂交瘤细胞株ICP2B3，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19172。

本发明的第二个目的是提供一种他克莫司单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCC No. 19172的他克莫司单克隆抗体杂交瘤细胞株ICP2B3分泌产生。

本发明的第三个目的是提供他克莫司单克隆抗体的应用。

本发明的一种实施方式中，所述应用是建立他克莫司含量的免疫检测方法，用于临床血样中他克莫司浓度的监测。

本发明的第四个目的是提供制备他克莫司免疫原的方法，所述他克莫司免疫原的制备方法基本步骤为：

（1）他克莫司半抗原的制备：称取19mg 他克莫司，溶解于0.6mL甲醇:水:吡啶（体积比4:1:1）混合溶液中，加入13mg 羧甲基羟胺半盐酸盐（Carboxymethoxylaminehemihydrochloride，CMO），70℃水浴搅拌6h，室温避光静置过夜。随后，溶液通过氮气吹干，重悬于1mL三氯甲烷中，并用超纯水萃取三次。收集有机相，再次氮气吹干，终产物溶于1mL无水N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，即他克莫司半抗原。