[发明专利]一株他克莫司单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用在审
| 申请号： | 202010903260.5 | 申请日： | 2020-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN112029731A | 公开（公告）日： | 2020-12-04 |
| 发明（设计）人： | 胥传来;姜晓倩;匡华;徐丽广;孙茂忠;刘丽强;吴晓玲;宋珊珊;胡拥明;郝昌龙;吴爱红 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20;C07K16/44;C07K14/795;C07K14/77;C07D498/18;G01N33/577;G01N33/53 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙) 32104 | 代理人： | 时旭丹;张仕婷 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 克莫司 单克隆抗体 杂交瘤 细胞株 及其 应用 | ||
1.一株他克莫司单克隆抗体杂交瘤细胞株ICP2B3，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19172。
2.他克莫司单克隆抗体，其特征在于：它由权利要求1所述保藏编号为CGMCC No.19172的他克莫司单克隆抗体杂交瘤细胞株ICP2B3分泌产生。
3.他克莫司半抗原的制备方法，其特征在于：称取19mg 他克莫司，溶解于0.6mL混合溶液中，加入13mg 羧甲基羟胺半盐酸盐CMO，70℃水浴搅拌6h，室温避光静置过夜；随后，溶液通过氮气吹干，重悬于1mL三氯甲烷中，并用超纯水萃取三次；收集有机相，再次氮气吹干，终产物溶于1mL无水N,N-二甲基甲酰胺DMF中，即他克莫司半抗原。
4.根据权利要求3所述他克莫司半抗原的制备方法，其特征在于：所述混合溶液具体为甲醇:水:吡啶体积比为4:1:1的混合溶液。
5.免疫原他克莫司-KLH的制备方法，其特征在于：称取10mg的权利要求3制备所得他克莫司半抗原，将其溶解在800μL DMF中，然后加入6.3 mg 1-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC，5mgN-羟基琥珀酰亚胺NHS，该混合物在室温搅拌6h；称取5mg KLH，溶解于0.1M、pH9.4碳酸盐缓冲液CBS中；随后，逐滴将含半抗原溶液加入到KLH溶液中，室温反应8h，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原得到免疫原他克莫司-KLH。
6.包被原他克莫司-BSA的制备方法，其特征在于：称取10mg的权利要求3制备所得他克莫司半抗原，将其溶解在800μL DMF中，然后加入6.3mg 1-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC，5mg N-羟基琥珀酰亚胺NHS，该混合物在室温搅拌6h；称取5mg OVA，溶解于0.1M 、pH9.4碳酸盐缓冲液CBS中；随后，逐滴将含半抗原溶液加入到OVA溶液中，室温反应8h，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原得到包被原他克莫司-OVA。
7.权利要求2所述他克莫司单克隆抗体的应用，其特征在于：建立他克莫司含量的免疫检测方法，应用于临床血样中他克莫司浓度的监测。
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