[发明专利]一种检测苯醚甲环唑的试纸条及方法

说明书

本发明公开了一种检测苯醚甲环唑的试纸条及方法。该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板，所述反应膜上具有包被有苯醚甲环唑半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有苯醚甲环唑单克隆抗体‑胶体金标记物。本发明还提供一种应用上述试纸条检测果蔬样品中苯醚甲环唑的方法。本发明提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、适于大批量样本筛查等优点，能够满足我国食品监管部门开展现场监控和检测工作。

技术领域

本发明涉及一种检测苯醚甲环唑的试纸条及方法，具体涉及一种用于检测苯醚甲环唑的胶体金试纸条，其特别适用于果蔬中苯醚甲环唑残留的检测。

背景技术

苯醚甲环唑(Difenoconazole)，又名噁醚唑，是一种广谱高效的三唑类内吸性杀菌剂，属于14α-甾醇脱甲基化抑制剂，可以干扰菌丝生长，抑制病原体孢子萌发，最终抑制真菌生长。苯醚甲环唑具有保护和治疗作用，被广泛应用于谷物、油料、水果、蔬菜、花生、甜菜、茶叶、人参等作物以控制病虫害，主要用于防治灰腐病、霜霉病和白粉病，同时还可以抑制草莓和辣椒炭疽病。但由于其是直接喷洒于作物上，使人们易受其危害，因此我国国家标准GB 2763-2019《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中规定了不同食品中苯醚甲环唑的残留限量。

目前已报道的检测苯醚甲环唑的方法主要是气相色谱法、气相色谱-质谱法和高效液相色谱法等仪器方法。这些方法均须在实验室条件下操作，样品前处理繁琐费时，还需配备昂贵的仪器设备，检测成本较高、耗时长、操作复杂，在实际应用过程中有很大的限制性，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要。因此，开发一种简单快速、适用于果蔬中苯醚甲环唑残留的胶体金试纸条，可满足大量样品现场筛选和监控，能够更好地满足我国食品监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够检测果蔬中苯醚甲环唑残留的胶体金试纸条，并且提供一种高效、准确、简便、适于现场监控和大量样本筛查的检测方法。

本发明所提供的检测苯醚甲环唑的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；所述反应膜上具有包被有苯醚甲环唑半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线；所述结合物释放垫上喷涂有苯醚甲环唑单克隆抗体-胶体金标记物。

所述苯醚甲环唑单克隆抗体是以苯醚甲环唑半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。

所述苯醚甲环唑半抗原-载体蛋白偶联物由苯醚甲环唑半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，所述苯醚甲环唑半抗原是以苯醚甲环唑杂质1为起始原料，经溴化反应，得到中间体溴代物，再与氨基丙酸进行亲核取代反应得到，其分子结构式为：

所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上，所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：

1)制备喷涂有苯醚甲环唑单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2)制备具有包被有苯醚甲环唑半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

具体地说，步骤包括：

1)以苯醚甲环唑杂质1为起始原料，经溴化反应，得到中间体溴代物，再与氨基丙酸进行亲核取代反应，制备苯醚甲环唑半抗原；