[发明专利]一种高通量评价大曲产乳酸能力的方法

权利要求书

1.一种测定大曲乳酸含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)样品的处理：将大曲浸提液加入MRS培养基中，培养，取上清液；

(2)反应液的制备：向缓冲溶液中加入乳酸氧化酶、辣根过氧化物酶；

(3)制备乳酸标准品的标准曲线；

(4)取步骤(1)上清液稀释后，加入步骤(2)的反应液中，振荡反应后，测定的吸光度；根据步骤(3)中的标准曲线，计算出乳酸的含量；

所述样品为大曲浸提液。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大曲浸提液的制备步骤包括：

称取大曲于无菌摇菌管，随后加入无菌水，涡旋振荡1.5min以上取浸提液；

优选地，所述大曲与水的比例为0.5-4g：6-9.5mL；

优选地，所述大曲与水的比例为1-2g：8-9mL；

优选地，所述大曲与水的比例为1.0g：9mL；

优选地，所述大曲选自白酒生产过程中使用的由小麦发酵而成的大曲，包括高温大曲、中温大曲和低温大曲；

优选地，所述大曲选自酱香型白酒生产过程中使用的高温大曲。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品处理的步骤包括：加入MRS液态培养基与大曲浸提液的体积比为12-19：1-8，培养温度为30-45℃，培养时间为3-7d；

优选地，所述MRS液态培养基与大曲浸提液的体积比为15-18：2-5；

优选地，所述MRS液态培养基与大曲浸提液的体积比为9：1；

或优选地，所述培养温度为35-40℃，培养时间为5-7d。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液的组分包括：无水磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钠、N-乙基-N-(2羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐、4-氨基安替比林；

优选地，所述缓冲溶液中含有无水磷酸二氢钾3-7g/L、无水磷酸氢二钠6-10g/L、N-乙基-N-(2羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐0.5-3g/L、4-氨基安替比林0.05-0.3g/L；

优选地，所述缓冲溶液中含有无水磷酸二氢钾4-6g/L；进一步优选为5.6g/L；

优选地，所述缓冲溶液中含有无水磷酸氢二钠7-9g/L，进一步优选为8.7g/L；

优选地，所述缓冲溶液中含有N-乙基-N-(2羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐1-2g/L；

优选地，所述缓冲溶液中含有N-乙基-N-(2羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐1.85g/L；

优选地，所述缓冲溶液中含有4-氨基安替比林0.05-0.2g/L，进一步优选为0.08g/L。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应液中包含乳酸氧化酶100-400U/L，辣根过氧化物酶200-700U/L；

优选地，所述反应液中包含乳酸氧化酶200-350U/L；进一步优选为250U/L；

优选地，所述反应液中辣根过氧化物酶300-500U/L；进一步优选为400U/L。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乳酸标准品的浓度范围为0.01-1g/L；

优选地，所述乳酸标准品的浓度范围为0.01-0.5g/L；

优选地，所述乳酸标准品的浓度范围为0.01-0.2g/L；

优选地，所述乳酸标准品的浓度范围为0.01-0.15g/L。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述上清液稀释倍数为10-60倍。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，加入上清液稀释液与反应液的体积比为1-4：20-50，振荡反应温度为35～40℃，振荡时间为5-25min。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，加入上清液稀释液与反应液的体积比为2：20-40，振荡时间为10-15min；优选地，振荡时间为10min。

10.权利要求1-9所述的方法在评价大曲产乳酸能力中的应用。