[发明专利]一种有抗病毒作用的仙人掌果酸性多糖及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种有抗病毒作用的仙人掌果酸性多糖及其制备方法和应用。本发明首次提取从海南仙人掌果中提取到了仙人掌果的酸性多糖，可以用于番茄曲叶黄化病毒防治，其效果优于阿泰灵。采用了充氮保护法，充分保护了仙人掌果的酸性多糖，防止了多糖氧化，保护其活性。使用了复合制剂，对于病毒宿主烟粉虱有杀灭作用，可以共同协调作用，防治病毒。

技术领域：

本发明属于病虫害防治技术领域，具体涉及一种从海南仙人掌果中分离得到的仙人掌果酸性多糖，以及利用仙人掌果酸性多糖抑制番茄曲叶黄化病毒衣壳蛋白形成的方法，且配合杀虫真菌抑制番茄曲叶黄化病毒的宿主烟粉虱，通过复合制剂，联合防治番茄曲叶黄化病毒。

背景技术：

番茄曲叶黄化病毒病为近年来严重影响我国番茄生产的一种新型病害，防治难度大，对于番茄幼苗能使其严重矮化，无法正常生长，对于番茄成株，能使其生长缓慢停滞，由顶部叶片开始发黄，新生叶片变小萎缩，叶边缘逐渐卷曲，叶面异常增厚，叶背面呈现黑紫色，新芽减少，结果期使果实着色不均匀，烂果，严重影响果实产量。

现有的防治方法以喷洒化学农药为主，容易导致烟粉虱产生耐药性，在结果期喷洒过量容易导致农药残留超标，影响番茄果实食用安全性。

发明内容：

本发明的目的是提供一种具有抗番茄曲叶黄化病毒活性的仙人掌果酸性多糖及其制备方法和应用。

本发明的具有抗番茄曲叶黄化病毒活性的仙人掌果酸性多糖是通过以下方法制备的：

A、取海南野生仙人掌果，烘干后粉碎，在氮气保护下，用乙醇或乙醇水溶液浸提，收集提取液，浓缩得到提取物，提取物用水溶解，在氮气保护下，调PH值10，冰浴超声搅拌萃取，得到胶状沉淀，将胶状沉淀用水反复冲洗直至脱盐，冷冻干燥后得到仙人掌多糖粗提取物；

B、将仙人掌多糖粗提取物加入到水中，在氮气保护下，加入蛋白质水解酶酶解，采用Sevage法在冰浴条件下去除蛋白，离心，然后去除有机溶剂层和蛋白质层，收集下层溶液，浓缩后再经冷冻干燥获得仙人掌果多糖去蛋白提取物；

C、将仙人掌果多糖去蛋白提取物经过DEAE-52纤维素柱层析，去除中性多糖，获得酸性多糖各个级分，然后将酸性多糖各个级分经SephadexG-100凝胶柱进一步纯化，收集目标分子量48-260KDa的多糖，即得目标酸性多糖(仙人掌果酸性多糖)。

优选，所述的在氮气保护下，是置于多糖提取装置氮气提取罐中，所述的多糖提取装置氮气提取罐包括超声破碎仪、氮气反应瓶、制冷及加热水浴锅和磁力底座，所述的氮气反应瓶置于制冷及加热水浴锅中，在制冷及加热水浴锅下方、对应氮气反应瓶的下方设有磁力底座，所述的氮气反应瓶的瓶口设有带孔硅胶瓶塞封闭氮气反应瓶的瓶口，所述的超声破碎仪的探头穿过带孔硅胶瓶塞伸入氮气反应瓶中，在氮气反应瓶的上部设有排气口、进气口和加样口。

所述的步骤A为：取海南野生仙人掌鲜果，于60℃下烘干粉碎至400目以下，在氮气氛围下，用体积分数80％的乙醇水溶液浸提，收集提取液，浓缩至原体积的1/3,得到提取物，提取物按照质量比1:100的比例加入到水中，在氮气保护下，用0.5M NaOH调PH值至10，冰浴超声磁力搅拌萃取10min，得到胶状沉淀，将胶状沉淀用水反复冲洗直至脱盐，冷冻干燥后得到仙人掌多糖粗提取物；

所述的步骤B为：取仙人掌多糖粗提取物，按照质量比1：100的体积加入超纯水，在氮气保护下，磁力搅拌10min，加入1/1000质量的蛋白质水解酶，37℃磁力搅拌水浴酶解40min，降解粗提取物中的大分子蛋白质，此后加入Sevage试剂，氮气保护下冰浴，20min，离心收集粗提物溶解液I，将溶解液I离心，去除有机溶剂层，及两相交界处蛋白质杂质，收集下层溶液II，旋转蒸发浓缩至1/10体积，冷冻干燥得到仙人掌果多糖去蛋白提取物。