[发明专利]一种有抗病毒作用的仙人掌果酸性多糖及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有抗番茄曲叶黄化病毒活性的仙人掌果酸性多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、取海南野生仙人掌果，烘干后粉碎，在氮气保护下，用80%乙醇水溶液浸提，收集提取液，浓缩得到提取物，提取物用水溶解，在氮气保护下，调pH值至10，冰浴超声搅拌萃取，得到胶状沉淀，将胶状沉淀用水反复冲洗直至脱盐，冷冻干燥后得到仙人掌多糖粗提取物；

B、将仙人掌多糖粗提取物加入到水中，在氮气保护下，加入蛋白质水解酶酶解，采用Sevage法在冰浴条件下去除蛋白，离心，然后去除有机溶剂层和蛋白质层，收集下层溶液，浓缩后再经冷冻干燥获得仙人掌果多糖去蛋白提取物；

C、将仙人掌果多糖去蛋白提取物经过DEAE-52 纤维素柱层析，去除中性多糖，获得酸性多糖各个级分，然后将酸性多糖各个级分经SephadexG-100 凝胶柱进一步纯化，收集目标分子量48-260kDa的多糖，即得仙人掌果酸性多糖。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的在氮气保护下，是置于多糖提取装置氮气提取罐中，所述的多糖提取装置氮气提取罐包括超声破碎仪、氮气反应瓶、制冷及加热水浴锅和磁力底座，所述的氮气反应瓶置于制冷及加热水浴锅中，在制冷及加热水浴锅下方、对应氮气反应瓶的下方设有磁力底座，所述的氮气反应瓶的瓶口设有带孔硅胶瓶塞封闭氮气反应瓶的瓶口，所述的超声破碎仪的探头穿过带孔硅胶瓶塞伸入氮气反应瓶中，在氮气反应瓶的上部设有排气口、进气口和加样口。

3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤A为：取海南野生仙人掌鲜果，于60℃下烘干粉碎至400目以下，在氮气氛围下，用体积分数80%的乙醇水溶液浸提，收集提取液，浓缩至原体积的1/3,得到提取物，提取物按照质量比1:100的比例加入到水中，在氮气保护下，用0.5M NaOH调pH值至10，冰浴超声磁力搅拌萃取10min，得到胶状沉淀，将胶状沉淀用水反复冲洗直至脱盐，冷冻干燥后得到仙人掌多糖粗提取物。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤B为：取仙人掌多糖粗提取物，按照质量比1：100的体积加入超纯水，在氮气保护下，磁力搅拌10min，加入1/1000质量的蛋白质水解酶，37℃磁力搅拌水浴酶解40min，降解粗提取物中的大分子蛋白质，此后加入Sevage试剂，在氮气保护下冰浴20min，离心收集粗提物溶解液I，将溶解液I离心，去除有机溶剂层，及两相交界处蛋白质杂质，收集下层溶液II，旋转蒸发浓缩至1/10体积，冷冻干燥得到仙人掌果多糖去蛋白提取物。

5. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤C的将仙人掌果多糖去蛋白提取物经过DEAE-52 纤维素柱层析，去除中性多糖，获得酸性多糖各个级分具体是将仙人掌果多糖去蛋白提取物依次用蒸馏水、0.1、0. 2、0. 5、0. 8 mol•L^-1NaCl、0. 1 mol•L^-1NaOH溶液梯度洗脱，收集洗脱液，并合并各主峰溶液，直至去离子水透析至袋外溶液与 1%AgNO₃反应为阴性后，停止透析，冻干，得到水洗脱的中性多糖部分和酸性多糖各个级分，所述的步骤C的将酸性多糖各个级分经SephadexG-100 凝胶柱进一步纯化，收集目标分子量48-260KDa的多糖是取酸性多糖各个级分经SephadexG-100 凝胶柱进一步纯化，以 0.1mol•L^-1NaCl 溶液洗脱，合并同一色谱峰的各管收集液，去离子水透析，冻干，收集目标分子量48-260kDa的多糖。

6.一种按照权利要求1、2、3、4或5所述的制备方法制备得到的仙人掌果酸性多糖。

7.权利要求6所述的仙人掌果酸性多糖在制备番茄曲叶黄化病毒防治药物中的应用。

8.一种番茄曲叶黄化病毒防治药物，其特征在于，含有权利要求6所述的仙人掌果酸性多糖作为活性成分。