[发明专利]烟草PVY预警基因Ntab0224260及其应用

说明书

本发明属于烟草基因组解析和烟草栽培技术领域，具体涉及烟草马铃薯Y病毒病预警基因及其应用专利申请事宜。预警基因Ntab0224260碱基序列分别如SEQ ID No.1所示。本申请所提供的预警基因，具有响应快速、灵敏度高的技术优点，而且由于是检测烟草基因组（现有技术，多是检测病菌基因组），因此具有便捷的技术优势。本申请不仅可为马铃薯Y病毒病的监测和早期预防奠定一定技术基础，也为其他烟草病害防控提供了借鉴和参考，因此具有较好的应用和科研价值。

技术领域

本发明属于烟草基因组解析和烟草栽培技术领域，具体涉及烟草马铃薯Y病毒病预警基因及其应用专利申请事宜。

背景技术

烟草栽培中，真菌、细菌和病毒等多种微生物都会导致烟草病害的发生，同时，蚜虫等具有刺吸式口器的昆虫也会向烟草传播病原体并进而导致其产生病害。而由于微生物个体小，再加上烟草病害的传播途径多样，给烟草病害的发生和流行规律研究带来不小的困难。现有技术中，一般采用病情指数等指标来反映病害的发生、发展和流行规律，但这种评价方法通常要等到发病、甚至开始蔓延后才能够对病害的发生或流行做出判断，而这往往容易延误后续的防治。理论而言，如果能在病原体侵染烟草早期时，就能够通过及时检测到并做出预警，可为后续病害跟踪、病害发展及流行趋势判断奠定良好基础，也可为控制病害大规模的蔓延争取到足够的时间。

马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY）引起的烟草病毒病在世界范围内都有分布，又称作黄斑坏死病、脉坏死病、褐脉病等，也是我国烟草种植过程中普遍发生的病毒病之一。早期感染该病毒病的烟草株系，可导致绝产绝收，损失惨重；接近收获期感染的烟草株系，产量损失可达25%-45%。PVY除了引起烟草产量损失巨大外，更严重的是患病烟叶考晒后色泽和烟味较差，品质显著下降。

已有研究表明，烟草PVY的传播途径多样，一般主要通过汁液摩擦传染和蚜虫传播。植株之间病叶和健叶的摩擦接触，叶片上的茸毛稍有损伤，就有可能传染病毒，除此之外，农事操作时手、工具等与烟株的接触也会导致病毒的传播。蚜虫在病株上取食5秒即可获毒，传毒饲育10秒就能将病毒传播到健康烟株上。由于该病害传播范围广，传播途径多样，在烟株体内增殖和转移速度很快，因此提前预防和尽早预警显得尤为重要。

现有检测烟草病毒的主要方法有生物学测定、血清学测定、电子显微镜技术和分子生物学技术方法。其中生物学测定方法因工作量较大，且烟株症状反应常受土壤、环境和气候条件的影响，因此实际防治中往往无法应用。血清学测定（ELISA方法）虽然操作比较简便，但是由于交叉反应等问题，容易出现假阳性。电子显微镜技术尽管能够直接观察到病毒的大小、形态，但设备昂贵、技术要求高、且灵敏度较低，因此也无法实际用于病害防治。分子生物学技术中的逆转录PCR法（Reverse transcription PCR），通过特异性扩增出病毒自身的基因片段，可以实现对烟草病毒的早期检测和诊断，具有快速性和灵敏性优点，也是最有潜力的检测方法，但实际应用中，特定目标基因的筛选和确定是该方法应用的重要前提。总之，如何更为快速和及时的对烟草PVY进行鉴定，是PVY有效防控的重要前提。

发明内容

针对烟草马铃薯Y病毒（PVY），本申请目的在于提供两个能够在PVY感染早期即可快速响应的预警基因，从而为马铃薯Y病毒病的早期预防奠定良好技术基础。

本申请所采取的技术方案详述如下。

烟草马铃薯Y病毒病（PVY）预警基因Ntab0224260和Ntab0691000，其碱基序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，具体如下：

Ntab0224260基因序列（176bp，SEQ ID No.1），具体如下：