[发明专利]烟草PVY预警基因Ntab0224260及其应用

权利要求书

1.烟草PVY预警基因Ntab0224260，其特征在于，其碱基序列如SEQ ID No.1所示，具体如下：

GGGATTCCAAATTGCCCTCCAATTATCGGTATATTCTCGAGGAATTGCTGGCCATGAGTATTGCAGGCATGGGTAAAAAGGACATTTTTGCAAAGCTTTCCCGGCCCAATTCTTTTGATTCTGGCACAAAGGAGGTATGGATTGATCAGAATAATGGAGGGGTTTGTTTGGCAGTT。

2.权利要求1所述烟草PVY预警基因Ntab0224260在烟草马铃薯Y病毒病防治中应用，其特征在于，作为预警基因用于指示马铃薯Y病毒的感染情况。

3.针对权利要求1所述烟草PVY预警基因Ntab0224260的检测用PCR引物，其特征在于，具体引物序列为：

Ntab0224260-F：5’- GGGATTCCAAATTGCCCTCC-3’，

Ntab0224260-R：5’- AACTGCCAAACAAACCCCTC-3’。

4.利用权利要求3所述检测用PCR引物所制备的qRT-PCR检测试剂盒。

5.如权利要求4所述qRT-PCR检测试剂盒，其特征在于，包括有检测参考基因L25用引物，具体引物序列为：

L25-F：5’-CCCCTCACCACAGAGTCTGC-3’，

L25-R：5’-AAGGGTGTTGTTGTCCTCAATCTT-3’。

6.利用权利要求3所述PCR引物的烟草马铃薯Y病毒病检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

（一）提取待检烟叶样品总RNA，并反转录cDNA；

（二）以正常生长未感染烟株烟叶样品作为对照，以L25为参考基因，利用Ntab0224260-F/R引物对进行qRT-PCR检测，计算Ntab0224260的相对表达量；

所述参考基因L25，qRT-PCR检测时，具体引物序列为：

L25-F：5’-CCCCTCACCACAGAGTCTGC-3’，

L25-R：5’-AAGGGTGTTGTTGTCCTCAATCTT-3’；

（三）依据步骤（三）中表达量情况判定待检样品马铃薯Y病毒感染情况，具体而言：

相较于对照组，如果Ntab0224260的相对表达量变化不具有统计学意义，则表明待检样品未感染马铃薯Y病毒；

如果Ntab0224260的相对表达量升高低于2倍，则需停留不少于6h后重新检测判定；

如果Ntab0224260的相对表达量升高不低于2倍，则按照如下情况判定马铃薯Y病毒病发病阶段，后续可依据此发病阶段采取对应的防治措施；

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