[发明专利]一种用于快速鉴定枣实蝇的特异性引物对、试剂盒和方法在审

专利信息
申请号: 202010888872.1 申请日: 2020-08-28
公开(公告)号: CN111961735A 公开(公告)日: 2020-11-20
发明(设计)人: 王书平;何容;张小菊;梁帆;李飞 申请(专利权)人: 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心;浙江大学;乌鲁木齐海关技术中心;广州海关技术中心
主分类号: C12Q1/6888 分类号: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
代理公司: 佛山粤进知识产权代理事务所(普通合伙) 44463 代理人: 王余钱
地址: 200135 上*** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 一种 用于 快速 鉴定 枣实蝇 特异性 引物 试剂盒 方法
【权利要求书】:

1.一种用于快速鉴定枣实蝇的特异性序列,其特征在于,所述特异性序列为(AT)6A(AT)6。

2.一种根据权利要求1所述的用于快速鉴定枣实蝇特异性序列获得的特异性引物对,其特征在于,所述引物对的序列如SEQ ID NO:1-2所示。

3.一种用于快速鉴定枣实蝇的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述的特异性序列,以及权利要求2所述的特异性引物对序列。

4.权利要求2所述的特异性引物在鉴定枣实蝇物种中的应用。

5.权利要求3所述的试剂盒在鉴定枣实蝇物种中的应用。

6.一种基于快速鉴定枣实蝇的特异性序列设计引物鉴定的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)根据物种特异性SSR序列位点,利用软件设计引物,并在测序实蝇的基因组内进行比对,筛选出枣实蝇的特异性引物;

(2)利用实蝇基因组DNA作为模板,进行PCR扩增;

(3)PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳检测是否存在预期大小条带。

7.根据权利要求6所述的基于快速鉴定枣实蝇的特异性序列设计引物鉴定的方法,其特征在于,在步骤(1)中,设计引物时,扩增产物在2000bp以内。

8.根据权利要求6所述的基于快速鉴定枣实蝇的特异性序列设计引物鉴定的方法,其特征在于,在步骤(2)中,利用11种检疫性实蝇成虫,利用QIAGEN基因组DNA提取试剂盒提取DNA。

9.根据权利要求6所述的基于快速鉴定枣实蝇的特异性序列设计引物鉴定的方法,其特征在于,在步骤(2)中,PCR扩增的体系为20μL,其中包括2×Premix Ex Taq(Takara)10μL,DNA模板1μL,10μM浓度的上下游引物各1μL,余量为灭菌蒸馏水。

10.根据权利要求6所述的基于快速鉴定枣实蝇的特异性序列设计引物鉴定的方法,其特征在于,PCR扩增条件:95℃预变性3min,94℃变性45s,56℃退火45s,72℃延伸45s,35个循环后72℃延伸5min。

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