[发明专利]枣疯病感病程度快速鉴定方法

说明书

本发明实施例提供一种枣疯病感病程度快速鉴定方法，该方法包括：对待检测植物样本提取DNA，制成预设浓度的工作液；根据所述工作液的用量，按预设比例，加入特异性扩增引物和2×Taq预混聚合酶链式反应PCR反应液，制成反应体系；对所述反应体系进行PCR扩增，根据得到扩增条带的循环反应次数，确定枣疯病感病程度；其中，枣疯病感病程度和得到扩增条带的循环反应次数的对应关系，在相同预设浓度和预设比例条件下，经试验得到。该方法根据扩增条带的循环反应次数确定感病程度，能够实现对枣疯病组织内菌含量的快速分级检测分析，实现了快速评估带菌植株的病原植原体含量、感病程度。

技术领域

本发明涉及农作物病虫害技术领域，尤其涉及一种枣疯病感病程度快速鉴定方法。

背景技术

枣疯病又名丛枝病，是枣树的一种毁灭性病害。染病枣树，花退化畸形，枝叶细小且丛生，叶片皱缩不伸展，造成大量植株滞长或死亡。枣树疯病是所有枣树病害中最为严重的一种毁灭性的病害。枣疯病可通过嫁接和分根传播。经嫁接传播，病害潜育期在25天至1年以上。

枣疯病是由病毒和类菌原体混合侵染发病，最初从一个或几个枝条开始发病，随着病情的扩展，传播到其他枝条，最后扩展至整个植株。枣树染病后，患病枝条不结果，健康枝条能结果，但果实着色不匀，果面凸凹不平，果汁变少，多渣且味淡。且目前尚无枣疯病治疗康复的相关报道。因此提供一种快速的枣疯病鉴定分级方法，对于枣疯病的防控和研究具有重要的意义。

由于枣疯病植原体严格寄生于植物的韧皮部，不能进行人工培养，因而对其病原基因组、致病分子机理研究都比较缺乏。目前，通过田间检测可以通过叶片变化判断其感病程度，但是存在误判，且无法进行潜伏期识别。

发明内容

本发明实施例提供一种枣疯病感病程度快速鉴定方法，用以解决现有技术中的缺陷。

本发明实施例提供一种枣疯病感病程度快速鉴定方法，包括：对待检测植物样本提取DNA，制成预设浓度的工作液；根据所述工作液的用量，按预设比例，加入特异性扩增引物和2×Taq预混聚合酶链式反应PCR反应液，制成反应体系；对所述反应体系进行PCR扩增，根据得到扩增条带的循环反应次数，确定枣疯病感病程度；其中，枣疯病感病程度和得到扩增条带的循环反应次数的对应关系，在相同预设浓度和预设比例条件下，经试验得到。

根据本发明一个实施例的枣疯病感病程度快速鉴定方法，对所述反应体系进行PCR扩增之后，还包括：对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过凝胶成像系统得到扩增条带的扩增结果。

根据本发明一个实施例的枣疯病感病程度快速鉴定方法，对待检测植物样本提取DNA之前，还包括：获取不同枣疯病感病程度的测试样本，提取DNA制成相同预设浓度的工作液；按相同预设比例，加入特异性扩增引物和2×Taq预混聚合酶链式反应PCR反应液，制成反应体系；对不同枣疯病感病程度的反应体系进行PCR扩增，确定不同枣疯病感病程度得到扩增条带的循环反应次数。

根据本发明一个实施例的枣疯病感病程度快速鉴定方法，所述制成预设浓度的工作液，包括：对DNA进行浓度测量，并用超纯水将DNA模板配制成浓度为20ng/μl的工作液。

根据本发明一个实施例的枣疯病感病程度快速鉴定方法，按预设比例，加入特异性扩增引物和2×Taq预混聚合酶链式反应PCR反应液，制成反应体系，包括：取4μl所述工作液，加入特异性扩增引物R16mF2和R16mR1各0.4μl，2×Taq预混PCR反应液10μl，加入超纯水5.2μl，制成20μl反应体系。

根据本发明一个实施例的枣疯病感病程度快速鉴定方法，根据得到扩增条带的循环反应次数，确定枣疯病感病程度，具体为：得到扩增条带的循环次数20、25和30，分别对应枣疯病重度、中度和轻度感染。