[发明专利]一种应用斜生栅藻测试微塑料生物毒性的方法

权利要求书

1.一种应用斜生栅藻测试微塑料生物毒性的方法，其特征在于具体步骤为：

（1）通过预实验配制塑料微球储备液，将储备液置于4℃冰箱待用；

（2）培养斜生栅藻使其达到对数生长期，用血球计数板在显微镜下计数，当藻密度为5×10⁵个/mL时，将其作为实验藻液；

（3）将步骤（1）配制的储备液加入到96孔透明微孔板中，设置好微孔板中塑料微球浓度梯度，然后向96孔透明微孔板中加入步骤（2）得到的实验藻液，制作塑料微球和实验藻液的反应体系，为防止产生边缘效应，周边孔每孔加入300μL超纯水，实验组每孔含100μL实验藻液和100μL不同浓度的塑料微球，空白对照组每孔含100μL实验藻液和100μL超纯水，实验组和空白对照组每孔总体积为200μL；静置15min，待反应体系混合均匀后，采用多功能酶标仪测试在681nm下斜生栅藻的0h吸光值RLU；然后将96孔透明微孔板置于光照3000lux、温度22℃的光照培养箱中培养，96h后再采用多功能酶标仪测试在681nm下斜生栅藻的吸光值RLU；相同条件下，每个塑料微球浓度进行9次重复实验，并取平均值；

（4）利用实验组与空白对照组的吸光值来计算斜生栅藻的生长抑制率，以塑料微球的不同浓度为横坐标，以不同浓度对应的生长抑制率为纵坐标，利用基于Matlab自编的Weibull函数和Logit函数对不同浓度塑料微球与生长抑制率E进行非线性拟合：

；

式中：I₀为空白对照组的RLU平均值，I为实验组各浓度9次平行样的RLU平均值；最后，利用基于Matlab自编的Weibull函数和Logit函数拟合计算出EC₅₀值，其负对数pEC₅₀，以pEC₅₀作为毒性指标，判断塑料微球的毒性大小，pEC₅₀的数值越大，毒性越大。