[发明专利]一种检测粉红副尼丽鱼种群的引物组、试剂盒和方法

权利要求书

1.一种检测粉红副尼丽鱼(Paraneetroplus synspilus)种群的引物组，其特征在于，包括上游引物、下游引物和荧光探针；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.一种检测粉红副尼丽鱼种群的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组、DNA提取试剂和qPCR扩增试剂。

3.一种检测粉红副尼丽鱼种群的方法，包括以下步骤：

1)从待检测环境中采集环境eDNA样本，

2)提取所述环境eDNA样本中的DNA获得DNA样本液；

3)以所述DNA样本液为模板，用权利要求1所述的引物组进行qPCR扩增，并测定Ct值，当所述Ct值小于或等于35时判定结果为阳性，即待检测环境中存在粉红副尼丽鱼种群，当Ct值大于35时判定结果为阴性，即环境中不存在粉红副尼丽鱼种群。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，环境eDNA样本为水样或底泥样本。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，当所述环境eDNA样本为水样时，对水样进行滤膜抽滤，将抽滤后的滤膜置于酒精中浸泡后，提取DNA。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，当所述环境eDNA样本为底泥样本时，将所述底泥样本与液氮混合研磨后，提取DNA。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述qPCR扩增的体系以20μL计，包括以下组分：PremixExTaq 10μL、10μM的上游引物0.5μL、10μM的下游引物0.5μL、10μM的荧光探针0.5μL、100g/μL的DNA样本液1μL和去离子水7.5μL。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述qPCR扩增的程序包括：95℃预变性10s；95℃变性10s，57℃退火10s，72℃延伸10s，共40个循环；72℃延伸3min，4℃保存。