[发明专利]用于检测新型冠状病毒的引物探针组合、试剂盒和方法有效
| 申请号： | 202010880535.8 | 申请日： | 2020-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN111910023B | 公开（公告）日： | 2022-04-15 |
| 发明（设计）人： | 应斌武;刘堂喻亨;赵珍珍;王旻晋;陆小军;宋兴勃 | 申请（专利权）人： | 四川大学华西医院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 成都科海专利事务有限责任公司 51202 | 代理人： | 李俊 |
| 地址： | 610000 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 新型 冠状病毒 引物 探针 组合 试剂盒 方法 | ||
1.一种用于检测新型冠状病毒的引物探针组合，其特征在于，包含两组用于检测新型冠状病毒核酸的引物和探针：探针I的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，引物对I的序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示；探针II的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，引物对II的序列如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示；
还包含一组内控引物和探针：内控探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，内控引物对的序列如SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示。
2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述探针I和引物对I的检测通道为FAM，所述探针II和引物对II的检测通道为VIC，所述内控引物和探针的检测通道为CY5。
3.一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的用于检测新型冠状病毒的引物探针组合。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反应缓冲液、逆转录酶、Taq DNA聚合酶、ROX染料、内控DNA和无核酸酶水。
5.一种新型冠状病毒核酸检测的方法，其特征在于，所述方法为非疾病诊断目的，所述方法包括以下步骤：
将采集到的临床样本进行核酸提取并纯化，得到待测样品；采用权利要求3所述的检测新型冠状病毒的试剂盒对待测样品进行检测，得到检测数据；以及对检测数据进行读取，得到检测结果。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述临床样本为人体的鼻拭子、咽拭子、痰液或肺泡灌洗液；所述检测为多重数字PCR方法进行检测；所述待测样品的检测限≥5copies/反应。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述多重数字PCR的方法依次包括逆转录、预变性、变性并延伸三个步骤，所述逆转录步骤中的逆转录温度为45-55℃，逆转录时间为30-60min，循环数为1个；所述预变性步骤中的预变性温度为93-97℃，预变性时间为3-7min，循环数为1个；所述变性并延伸的循环数为42-48个，其中所述变性温度为92-98℃，所述变性时间为10-20s，所述延伸的温度为55-65℃，所述延伸的时间为40-80s。
8.权利要求1或2所述的引物探针组合在检测新型冠状病毒中的应用，所述应用为非疾病诊断目的。
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