[发明专利]一种制备大小均匀的输卵管小体的方法

权利要求书

1.一种制备大小均匀的输卵管小体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、解剖处于发情间期的哺乳动物，获得输卵管及输卵管液，具体如下：

S11、吸取生理盐水置于哺乳动物的阴道口，反复抽吸得到含有阴道分泌物的生理盐水；

S12、显微镜下观察阴道分泌物的细胞形态学特征，根据判断标准判断哺乳动物是否处于发情间期；所述的判断标准为：处于发情间期的哺乳动物阴道分泌物中白细胞占81%-93%，角化上皮细胞占1%-2%，有核上皮细胞占5%-18%；

S13、解剖处于发情间期的哺乳动物，分离去除输卵管周围粘连组织，收集输卵管，剪切输卵管后放置于培养基或磷酸盐缓冲液中得到输卵管及输卵管液；

S2、将所述输卵管及输卵管液经常速离心获取上清液；

S3、将所述上清液经超速离心，保留沉淀；混悬沉淀于所述适量液体中，收集混悬液，得到大小均匀的输卵管小体，所述的输卵管小体的粒径为5~15nm；

所述的哺乳动物为小鼠。

2.根据权利要求1所述的制备大小均匀的输卵管小体的方法，其特征在于，所述的培养基为人输卵管液。

3.根据权利要求1所述的制备大小均匀的输卵管小体的方法，其特征在于，所述的将所述输卵管及输卵管液经常速离心获取上清液，具体如下：

将输卵管及输卵管液300~5000g离心5~30min获取上层液体，将所述上层液体5000~20000g离心5~60min得到上层清液。

4.根据权利要求1所述的制备大小均匀的输卵管小体的方法，其特征在于，所述超速离心为在1~8℃条件下，100000~400000g离心0.5~10小时。

5.一种根据权利要求1~4任意一项所述的制备大小均匀的输卵管小体的方法获得的输卵管小体在制备药物载体中的应用。

6.根据权利要求5所述的输卵管小体在制备药物载体中的应用，其特征在于，所述的药物为蛋白质或miRNA。

7.根据权利要求6所述的输卵管小体在制备药物载体中的应用，其特征在于，所述的蛋白质为质膜钙三磷酸腺苷酶、HSC70、CD81、CD109、CD151、CD14、ITGA1、ITGA3、ITGA4、ITGA6、ITGA7、ITGA8、ITGA9、ITGA11、ITGAV、ITGAM、ITGB1、ITGB2、ITGB3、ITGB4、ITGB7、ITGB8、ITGB1BP2、ANXA1-9、ANXA11、RAB1B、RAB3C、RAB4A、RAB5C、RAB11A、RAB10-14、RAB21、RAB28、RAB35、HSP90、HSP70、HSPA4、HSB1、HSPA8、HSPA1A、VPS13C、PDCD6IP、DYNC1LI1 SNAP23、COPA、ARF1、CLTC。

8.根据权利要求6所述的输卵管小体在制备药物载体中的应用，其特征在于，所述miRNA为miR-143-3p、miR-21a-5p、miR-26a-5p、let-7f-5p、miR-27b-3p、miR-10b-5p、let-7c-5pmiR-22-3pmiR-148a-3plet-7i-5p、let-7a-5p、miR-145a-5p、miR-126a-5p、miR-10a-5p、miR-191-5p、let-7g-5p、miR-340-5p、miR-192-Sp、miR-196b-5p、miR-199a-3p、miR-34c-5p、miR-181a-5p、miR-181c-5p、miR-27a-3p、miR-98-5p、miR-25-3p、miR-16-5p、let-7b-5p、miR-99b-5p、miR-26b-5p、miR-30c-5p、miR-127-3p、let-7d-5p、miR-101a-3p、miR-142-5p、miR-151-3p、miR-30b-5p、miR-151-3p、Iet-7d-5p、miR-29a-3p、miR-30a-5p、miR-146a-5p、miR-195a-5p、miR-199b-5p、miR-378a-3p、miR-99a-5p、miR-199a-5pmiR-93-5pmiR-126a-3p或miR-125b-5p。