[发明专利]EB病毒阴性的NK-92细胞及其制备方法有效
| 申请号： | 202010872058.0 | 申请日： | 2020-08-26 |
| 公开（公告）号： | CN111926016B | 公开（公告）日： | 2022-12-09 |
| 发明（设计）人： | 栗凤鹏;曹青;李华顺 | 申请（专利权）人： | 阿思科力（苏州）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N9/20;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 苏州三英知识产权代理有限公司 32412 | 代理人： | 朱如松 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | eb 病毒 阴性 nk 92 细胞 及其 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种EB病毒阴性的NK-92细胞，其特征在于，由以下制备方法制备得到：
1)设计用于EB敲除的两个sgRNA，再将其扩增得到用于EB病毒敲除的sgRNA，所述sgRNA用于敲除EB中的OriP区域；
所述两个sgRNA分别为sgRNA1和sgRNA2，所述sgRNA1的序列如SEQ ID NO:1所示；所述sgRNA2的序列如SEQ ID NO:2所示；
2)将所述用于EB病毒敲除的sgRNA和Cas9配合使用，形成用于阻断EB病毒复制的RNP复合物，即用于EB病毒敲除的系统；
3)再将所述RNP复合物转入NK-92细胞中，再通过流式分选筛获得EB阴性的NK-92细胞。
2.根据权利要求1所述的EB病毒阴性的NK-92细胞，其特征在于，在步骤2)中，所述系统还包括质粒载体，所述Cas9设在所述载体上。
3.根据权利要求1所述的EB病毒阴性的NK-92细胞，其特征在于，在步骤2)中，所述Cas9的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述系统为CRISPR-Cas9系统。
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