[发明专利]一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法

说明书

本发明公开了一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法，属于甘蔗培育技术领域，所述方法包括选定遗传转化的甘蔗材料、菌种和质粒，配制愈伤组织诱导培养基M₁、分化培养基M₂、生根培养基M₃、转化培养基MR和共培养基M₄，对甘蔗愈伤组织的诱导及分化，制备农杆菌工程菌液，使用农杆菌介导对甘蔗生长点进行遗传转化，对转基因植株进行检测。本发明缩短了甘蔗获得转化植株的时间、提高了转化效率，通过农杆菌介导转化技术，把pCAMBIA3301植物表达载体导入GT35无菌幼苗中，经过筛选培养基筛选共得到353株抗性植株，对抗性植株进行PCR检测，333株成阳性，阳性率达94.33％，表明外源基因成功导入甘蔗中。

技术领域

本发明涉及甘蔗培育技术领域，尤其涉及一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法。

背景技术

由于甘蔗是非整倍性的异源多倍体作物，遗传背景复杂，品种间杂交后代分离广泛，用常规遗传学手段难以阐明其遗传规律，通过常规的杂交育种手段很难将各种优良的目标性状整合在一起，分子育种是获得甘蔗优良品种的重要手段。目前，在甘蔗遗传转化中主要使用的方法有农杆菌介导法和基因枪轰击法，不论是农杆菌介导法还是基因枪轰击法，其转化的受体都是胚性愈伤组织。这些传统的方法均是转化植株的时间比较长，同时效率不高的情况，无法满足现有社会的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法，解决现有甘蔗培育中农杆菌转化后愈伤组织再生困难的技术问题，缩短了获得转化植株的时间、提高了转化效率。

一种农杆菌介导甘蔗生长点遗传转化的方法，所述方法包括如下步骤：

步骤1：选定遗传转化的甘蔗材料、菌种和质粒；

步骤2：配制愈伤组织诱导培养基M₁、分化培养基M₂、生根培养基M₃、转化培养基MR和共培养基M₄；

步骤3：对甘蔗愈伤组织的诱导及分化；

步骤4：制备农杆菌工程菌液；

步骤5：使用农杆菌介导对甘蔗生长点进行遗传转化；

步骤6：对转基因植株进行检测。

进一步地，所述步骤1中甘蔗材料选用桂糖35号，菌种选用大肠杆菌菌株JM109和根癌农杆菌菌株EHA105，质粒选用pCAMBIA3301，质粒中含有CaMV 35s启动子以及含有编码抗除草剂草丁膦的Bar基因。