[发明专利]用于西尼罗河病毒检测的试剂、试剂盒、检测方法及应用

说明书

本申请公开了一种用于西尼罗河病毒检测的试剂、试剂盒、检测方法及应用。本申请试剂包括引物对和探针，引物对上/下游引物分别为Seq ID No.1和2所示序列，探针为Seq ID No.3所示序列或其反向互补序列；探针中，第30碱基修饰荧光基团6‑FAM‑Dt，第31碱基替换为碱基类似物dSpacer，第34碱基修饰荧光淬灭基团BHQ1‑dT，3’末端修饰C3 Spacer。本申请试剂，能通过RT‑RPA对WNV进行敏感、特异、高效检测，耗时短、灵敏度高、硬件设备要求低，不需复杂的样本处理，特别适于现场快速检测；这对WNV快速防控，防止疫情传播，减少经济损失，保障畜牧业养殖生产安全具有重大意义。

技术领域

本申请涉及西尼罗河病毒检测领域，特别是涉及一种用于西尼罗河病毒检测的试剂、试剂盒、检测方法及应用。

背景技术

西尼罗河病毒(WestNile virus，WNV)是一种虫媒病毒，属于黄病毒科黄病毒属，是一种单链RNA病毒，可影响鸟类、人类和马。该疾病最大的危害就是造成人和马患上致命的脑炎，鸡、鸟等小型动物死亡等，会导致严重的公共卫生问题。因此，快速准确的诊断西尼罗河病毒对疫病的防控意义重大。

野鸟是西尼罗河病毒的自然宿主，库蚊是主要传播媒介，病毒通过“鸟—蚊—鸟、人、其它动物”的生物传播链在自然界生存。1937年，该病毒在西尼罗河地区的乌干达被发现，因此而得名。2000年，在以色列中部和北部发现的439例神经侵袭性疾病，其中29人死亡。2017年，美国发生的2000多例西尼罗病毒感染病例，其中接近2/3的患者表现为严重的神经侵袭性疾病。该病对人类的健康和畜牧业的发展造成了极大的危害，世界卫生组织已将其列为当前全球的重大流行病之一。

随着经济发展，频繁的国际旅行、候鸟的迁徙及进口动物及动物产品贸易，各国都存在WNV的传入风险。为防止西尼罗病毒的病毒株从国外传入我国，建立一种简便、快速、准确的诊断方法，有利于尽早切断病原传播，降低经济损失。

目前，该病的病原检测方法包括病毒分离试验、RT-PCR、荧光定量PCR、巢式PCR、LAMP、二代测序技术等，抗体检测方法有ELISA、蚀斑减少中和试验(PRNT)。但这些检测技术方法操作复杂、对操作人员的技术要求高、检测时间长、难以适用于现场检测。因此亟需建立一种能够更好的适用于现场快速检测的WNV检测方法，以防止WNV传入或扩散，避免严重的公共卫生问题。

发明内容

本申请的目的是提供一种新的用于西尼罗河病毒检测的试剂、试剂盒、检测方法及应用。

本申请采用了以下技术方案：

本申请的一方面公开了一种用于西尼罗河病毒检测的试剂，该试剂包括引物对和探针，引物对的上游引物为Seq ID No.1所示序列，引物对的下游引物为Seq ID No.2所示序列，探针为Seq ID No.3所示序列或者Seq ID No.3所示序列的反向互补序列；

Seq ID No.1：5’-CCTGATTGAATTGGAACCACCCTTTGGAGACTCAT-3’

Seq ID No.2：5’-AGTCCCAAGCTGTATCTCCTAGGGCGGCTAATCTC-3’

Seq ID No.3：

5’-CATAGTGGTGGGCAGAGGAGAACAACAGATTAATCACCATTGGCACAAGTC-3’

Seq ID No.3所示序列的探针中，第30个碱基修饰荧光基团6-FAM-Dt，第31个碱基替换为碱基类似物dSpacer，第34个碱基修饰荧光淬灭基团BHQ1-dT，3’末端修饰C3Spacer。