[发明专利]一种基于DNA互锁结构的DNA分子检测方法

说明书

本发明具体涉及一种基于DNA互锁结构的DNA分子检测方法，属于基因诊断技术领域，所述检测方法为，根据待测DNA序列设计DNA单链环C1和DNA单链L2，DNA单链L2两端序列与DNA单链环C1的一段序列全部杂交，形成DNA单链双环C1C2，再与待测DNA杂交形成部分双链DNA，通过限制性内切酶切割双链DNA释放拓扑结构，以C1为模板进行RCA反应，在RCA反应产物基础上进行支链RCA反应，最后检测反应产物。本发明的DNA分子检测方法操作简单，对待测DNA具有高特异性，通过支链RCA反应放大检测信号，可以应用于背景复杂、含量低的DNA分子溶液的检测。

技术领域

本发明属于基因诊断领域，具体涉及一种基于DNA互锁结构的DNA分子检测方法。

背景技术

基因检测是通过血液、其他体液、或细胞对微量DNA进行检测的技术，是取被检测者外周静脉血或其他组织细胞，扩增其基因信息后，通过特定设备对被检测者细胞中的DNA分子信息作检测，分析它所含有的基因类型和基因缺陷及其表达功能是否正常的一种方法，可以诊断疾病，也可以用于疾病风险的预测。当前的DNA检测方法主要有ARMS-PCR(扩增难治性突变系统-PCR)，ddPCR(液滴数字PCR)或测序。这些方法不灵敏、复杂且耗时或者价格昂贵且需要专业实验培训。因此，必须建立一种价格合理、易于检测且同时具有高灵敏度和高特异性的微量DNA检测方法。

DNA不仅可以编码生物遗传信息，更重要的是能在DNA纳米科技领域里精确构建任意结构和功能纳米材料，可广泛用于逻辑电路和纳米器件等各个领域。由不同的DNA链差异引起的能量转化和协同作用已被广泛运用于构建纳米机器和纳米机器人。DNA互锁结构互锁结构通过机械键连有两个或多个单独的DNA环，具有高旋转自由度和相对自主得运动的机械键，可被运用到可逆逻辑电路、旋转电机和纳米接头等，目前互锁结构还没有被用于生物学诊断领域。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于DNA互锁结构的DNA分子检测方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

1、一种基于DNA互锁结构的DNA分子检测方法，所述检测方法步骤如下：

(1)根据待测DNA序列设计DNA单链环C1和DNA单链L2，DNA单链L2两端序列与DNA单链环C1的一段序列全部杂交，DNA连接酶连接DNA单链L2两端序列缺口，形成DNA单链双环C1C2；所述DNA单链L2的中间序列上具有与所述待测DNA互补的序列；

(2)待测DNA与DNA单链双环C1C2上的待测DNA互补序列杂交，形成部分双链DNA，所述部分双链DNA上具有限制性内切酶酶切位点；

(3)加入限制性内切酶切割步骤(2)中的限制性内切酶酶切位点，以DNA单链环C1为模板，进行RCA反应，得到RCA反应产物；

(4)在RCA反应产物基础上进行支链RCA反应，得到支链RCA反应产物，最后检测支链RCA反应产物中双链DNA含量。

作为优选的技术方案之一，步骤(1)中，步骤(1)中，所述DNA连接酶为T4连接酶。

作为优选的技术方案之一，步骤(1)中，步骤(4)中，所述检测为：用双链DNA荧光染料对所述支链RCA反应产物染色，荧光检测所述支链RCA反应产物双链DNA含量。

作为优选的技术方案之一，步骤(1)中，所述待测DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

作为优选的技术方案之一，步骤(1)中，所述DNA单链L2的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示。

作为优选的技术方案之一，步骤(1)中，所述DNA单链环C1的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

作为优选的技术方案之一，步骤(3)中，所述限制性内切酶为HpyCH4IV。