[发明专利]一种基于DNA互锁结构的DNA分子检测方法有效
| 申请号： | 202010850525.X | 申请日： | 2020-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN111926062B | 公开（公告）日： | 2021-03-23 |
| 发明（设计）人： | 阳莎;陈鸣;唱凯;詹新宇;肖瑶;汤晓琦;赵爽 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12Q1/682 | 分类号： | C12Q1/682;C12Q1/683 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 400038 重*** | 国省代码： | 重庆;50 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 dna 互锁 结构 分子 检测 方法 | ||
1.一种基于DNA互锁结构的非诊断性DNA分子检测方法，其特征在于，所述检测方法步骤如下：
（1）根据待测DNA序列设计DNA单链环C1和DNA单链L2，DNA单链L2两端序列与DNA单链环C1的一段序列全部杂交，DNA连接酶连接DNA单链L2两端序列缺口，形成DNA单链双环C1C2；所述DNA单链L2的中间序列上具有与所述待测DNA互补的序列；
（2）待测DNA与DNA单链双环C1C2上的待测DNA互补序列杂交，形成部分双链DNA，所述部分双链DNA上具有限制性内切酶酶切位点；
（3）加入限制性内切酶切割步骤（2）中的限制性内切酶酶切位点，以DNA单链环C1为模板，进行RCA反应，得到RCA反应产物；
（4）在RCA反应产物基础上进行支链RCA反应，得到支链RCA反应产物，最后检测支链RCA反应产物中双链DNA含量。
2.如权利要求1所述的DNA分子检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述DNA连接酶为T4连接酶。
3.如权利要求1所述的DNA分子检测方法，其特征在于，步骤（4）中，所述检测为：用双链DNA荧光染料对所述支链RCA反应产物染色，荧光检测所述支链RCA反应产物双链DNA含量。
4.如权利要求1-3任一所述的DNA分子检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述待测DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
5.如权利要求4所述的DNA分子检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述DNA单链L2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
6.如权利要求5所述的DNA分子检测方法，其特征在于，步骤（1）中，所述DNA单链环C1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
7.如权利要求4所述的DNA分子检测方法，其特征在于，步骤（3）中，所述限制性内切酶为HpyCH4IV。
8.如权利要求6所述的DNA分子检测方法，其特征在于，步骤（4）中，所述RCA反应中所用引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.4。
9.如权利要求6所述的DNA分子检测方法，其特征在于，步骤（4）中，所述支链RCA反应中所用正向和反向引物的核苷酸序列为SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6。
10.如权利要求9所述的DNA分子检测方法，其特征在于，所述检测方法的待测DNA最低检测限值为 0.2%。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院，未经中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202010850525.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
