[发明专利]一种无乳链球菌扩增引物组和应用及无乳链球菌的检测方法

权利要求书

1.一种无乳链球菌的扩增引物组，其特征在于，为：如SEQ ID NO：1所示的置换引物F1，如SEQ ID NO：2所示的置换引物F2，如SEQ ID NO：3所示的交叉内引物CP1，如SEQ ID NO：4所示的交叉内引物CP2和，

如SEQ ID NO：5-10所示的扩增引物C1、C2、D1、D2、R1和R2；

其中，所述扩增引物D1的5’端标记生物素，得到D1*；所述扩增引物R1的5’端标记荧光素，得到R1*。

2.根据权利要求1所述无乳链球菌的扩增引物组，其特征在于：所述扩增引物组用于多交叉恒温扩增无乳链球菌的特征基因groEL。

3.权利要求1-2任意一项所述的无乳链球菌的扩增引物组在制备无乳链球菌检测试剂盒中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒检测无乳链球菌过程包括以下步骤：

S1. 设计并提供所述无乳链球菌的扩增引物组：F1、F2、CP1、CP2、C1、C2、D1*、D2、R1*、R2；

S2. 在包括所述扩增引物组反应体系下，以待测无乳链球菌样品的基因组作为模板进行MCDA恒温扩增，得到扩增产物；

S3. 使用金纳米生物传感器检测步骤S2的扩增产物，获得检测结果。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述步骤S2中MCDA恒温扩增反应的温度为60-66℃。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述步骤S2中MCDA恒温扩增反应恒温在61℃ 30min，85℃ 5min终止反应。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述扩增引物组中，交叉引物CP1和CP2的浓度为60 pmol，置换引物F1和F2的浓度为10 pmol，扩增引物R1*，R2，D1*和D2的浓度为30pmol，扩增引物C1和C2 的浓度为20 pmol。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述MCDA恒温扩增反应体系包括，10mM的Betain，6 mM的MgSO₄，1mM的dNTP，12.5 μL的10×Bst DNA聚合酶缓冲液，10 U 的链置换DNA聚合酶，1μL的模板，补加去离子水至25μl。

9.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述金纳米生物传感器包括样品垫，金标垫，纤维膜，吸水垫及背板；所述样品垫，金标垫，纤维膜及吸水垫依次组装在背板上；将金纳米粒子偶联的链霉素亲和素包被在金标垫上包被上，抗荧光素抗体包被在检测线上，生物素偶联的牛血清蛋白包被在控制线上。

10.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述金纳米生物传感器包括30 nm的金纳米粒子偶联的链霉素亲和素。