[发明专利]一种NK细胞扩增组合物及体外扩增培养方法在审
| 申请号： | 202010844931.5 | 申请日： | 2020-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN114075546A | 公开（公告）日： | 2022-02-22 |
| 发明（设计）人： | 吕品雷;朱一;黄国军;陶其强;李文瑞;韦冬泉 | 申请（专利权）人： | 海南启研干细胞抗衰老医院有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京睿邦知识产权代理事务所(普通合伙) 11481 | 代理人： | 王冠 |
| 地址： | 571400 海南省琼海*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 nk 细胞 扩增 组合 体外 培养 方法 | ||
1.一种NK细胞扩增组合物，其特征在于，包括：
A组：T细胞培养液，IL-2；
B组：CD3单抗溶液，CD52单抗溶液；
C组：T细胞培养液，IL-2，IL-15，自体灭活血浆。
2.根据权利要求1所述的NK细胞扩增组合物，其特征在于，A组中，IL-2的浓度为1000IU/mL～4000IU/mL。
3.根据权利要求1所述的NK细胞扩增组合物，其特征在于，CD3单抗溶液和CD52单抗溶液的浓度分别独立地为5μg/mL～20μg/mL。
4.根据权利要求1所述的NK细胞扩增组合物，其特征在于，C组中，IL-2的浓度为200IU/mL～2000IU/mL，IL-15的浓度为2ng/mL～30ng/mL。
5.一种NK细胞体外扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取外周血单个核细胞，将外周血单个核细胞加入到A组培养液中培养，所述A组培养液为T细胞培养液+1000IU/mL～4000IU/mL IL-2。
(2)将步骤(1)处理后的外周血单个核细胞转入到5μg/mL～20μg/mLCD3单抗溶液和5μg/mL～20μg/mLCD52单抗溶液预处理的培养瓶中培养；
(3)将步骤(2)得到的细胞转入C组培养液中培养，所述C组培养液为T细胞培养液+200IU/mL～2000IU/mLIL-2+2ng/mL～30ng/mLIL-15+1～5％体积分数的自体灭活血浆。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)细胞培养的时间分别独立地为2～7小时。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述培养瓶预处理的方法为：在培养瓶中加入5μg/mL～20μg/mL CD3单抗溶液和5μg/mL～20μg/mL CD52单抗溶液，在4℃下包被孵育20～30小时。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述细胞培养的天数为15天。
9.根据权利要求5或8所述的方法，其特征在于，步骤(3)细胞培养的密度为1～3×106cell/mL。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(3)细胞在培养过程中，将细胞分离，并补充C组培养液。
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