[发明专利]感染性眼病病原体固相多重联排PCR检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种感染性眼病病原体固相多重联排PCR检测试剂盒及检测方法，包括：PCR混合液、固相化引物和探针、阳性对照、阴性对照、无RNase水；所述的固相化引物和探针为经固相化处理后的8种疱疹病毒引物和探针，分装于三联排PCR管内，每个PCR管内有2～3种疱疹病毒引物和不同荧光标记的探针，实现同时对8种疱疹病毒的检测，本发明的方案具有高灵敏性、高特异性，且可减少引物二聚体，提高扩增效率，通过从病人眼部采集泪液、角膜感染部位刮取组织、房水或玻璃体液等标本进行检测，能够简单、快速、准确的筛查到疾病关联病毒形成病原学诊断，可辅助临床进行有针对性的用药。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，涉及一种PCR检测试剂盒，尤其涉及一种感染性眼病病原体固相多重联排PCR检测试剂盒及检测方法。

背景技术

病毒，是一大类病原群，是感染性眼病最常见的致病原因，可以造成病毒性角膜炎(上皮炎、基质炎、内皮炎、小梁炎)，病毒性葡萄膜炎和病毒性视网膜炎等。临床上，病毒感染性眼病的发病率远比细菌、真菌或其它病原导致的感染性眼病高。就全球而言，病毒感染性眼病的发病率高、致盲率高，单就病毒性角膜炎，发病率就达10万分之150[1,2]，每年还新增病例10万分之10～30[3]。反复发作的病毒性角膜炎可导致角膜严重疤痕、甚至角膜穿孔；据WHO公报，病毒感染造成的角膜疤痕是致盲的第四大原因。

到目前为止，对于病毒感染性眼病的检测往往缺乏病原学依据的诊疗过程，漏诊率和误诊率无疑都很高。而基于临床观察又缺乏精确病原检测的治疗，更多的是根据表象的抗炎治疗，而非基于因果关系的针对性治疗，因误诊、误治而进入恶性循环的病例司空见惯，这样的诊疗实践既给患者的健康带来的严重后果，也不利于医务人员科学地总结经验，提高认识和诊疗水平。以病毒性角膜内皮炎为例，临床根据表现仅诊断为青光眼－睫状体炎综合征，用药仅给予抗炎和降眼压治疗，而非病毒针对性的药物治疗，最终导致不可逆转的角膜内皮失代偿而需要角膜移植的现象，门诊病例中极为普遍，究其原因就在于医生对病毒感染性眼病的认知度低，以及在临床实践中缺乏病原学检测的手段或者病原学检测的方法未普及到眼科等的现状有关。另外，即使针对基于经验性观察做出而做出的病毒感染性眼病诊断的患者，因为感染的病毒种类不明确，盲目使用抗病毒药物治疗，也达不到精确治疗的目的。因此，病毒感染性眼病的病原检测和诊断技术的开发和应用已显得极为迫切。

迄今为止，可以造成感染性眼病的病毒，绝大部分为人类疱疹类病毒，其中较常见的有：单纯疱疹病毒1型(HSV1)，带状疱疹病毒(VZV)，EB病毒(EBV)和巨细胞病毒(CMV)，较少见的有：单纯疱疹病毒2型(HSV2)和人类疱疹病毒(HHV)6,7,8等。HSV1是病毒性角膜上皮炎和基质炎最主要的病原，引起典型的临床表现有树枝样或地图样角膜上皮缺损，以及盘状角膜基质水肿等。VZV亦可引起角膜上皮炎和基质炎，表现为假树枝样的上皮缺损，以及钱币状或不定形角膜基质水肿混浊等。HSV1、VZV、CMV均可引起角膜内皮炎[4,5]，其典型的症状为逗点状，钱币样，网格状和线型KPs。VZV，EBV，CMV，HSV1，HSV2和HHV-6可引起葡萄膜炎，包括前葡萄膜炎或虹膜睫状体炎，以及后葡萄膜炎、急性视网膜坏死或全葡萄膜炎。据Sugita报道[6]，在100例葡萄膜炎(包括急性视网膜坏死)的前房水和玻璃体液中，65例标本中检测到病毒DNA，其中VZV占据21例(21％)，HSV1占7例(7％)，EBV和CMV各占6例(6％)，而HSV2和HHV-6分别为3例(3％)和1例(1％)。目前为止，HHV-7和HHV-8引起眼部组织的感染，仅有个例报道[7,8.9]。由此可见，病毒感染性眼病的两大主体——病毒性角膜炎和葡萄膜炎，均可由不同的病毒病原感染所致。不同的病毒，对不同的抗病毒药物的敏感性和有效性不一样，如HSV1，HSV2和VZV对阿昔洛韦和伐昔洛韦敏感，而CMV则对更昔洛韦比较敏感，如能进行病原检测，不仅能明确诊断，更能为选择特异性和针对性的抗病毒药物提供依据。