[发明专利]一种单纯疱疹病毒1型实时定量PCR检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种单纯疱疹病毒1型实时定量PCR检测试剂盒，所述检测试剂盒是针对以HSV1的UL40基因为靶目标，包括HSV1的特异性引物和特异性探针、阳性对照、阴性对照、2×PCR Mix、无RNase水；通过从病人眼部采集泪液、角膜感染部位刮取得组织、房水或玻璃体液等标本，能够快速，准确的形成病原学检测，同时对病毒载量实时监控，从而实现对患者的精准诊治，具有高灵敏性、高特异性、经济、简便、快速的特点。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，涉及一种PCR检测试剂盒，尤其涉及一种感染性眼病单纯疱疹病毒1型实时定量PCR检测试剂盒。

背景技术

单纯疱疹病毒1型(HSV1)是一种常见的病毒病原体，据世界卫生组织(WHO)统计，2015年全球超过37亿的50岁以下人口(即人口的67％)感染了HSV1[1]。HSV1是感染性眼病中最常见的病原，几乎可感染所有的眼部组织(包括眼睑，结膜，角膜，葡萄膜和视网膜)引起疾病[2]。临床上，HSV1感染性眼病的发病率远比其它病原体如细菌性、真菌性或其它更少见的病原感染性眼病高。就全球而言，感染性眼病的发病率和致盲率均很高，单就HSV1角膜炎，其发病率就达10万之11.8～31.5[3,4]，每年还新增病例10万之8.4[4]。反复发作的病毒性角膜炎可导致角膜严重疤痕、甚至角膜穿孔；据WHO公报，病毒感染造成的角膜疤痕是致盲的第四大原因。

根据流行病学等研究资料，HSV1感染类型可分为原发感染和复发感染。原发感染是指，病毒侵犯人体后，即诱发病毒增殖、产生炎症等对组织的破坏；复发感染是指，病毒侵犯人体后，病毒的一部分基因潜伏到神经节细胞[5，6]，当机体状态或免疫力下降时，病毒的潜伏状被激活，在感染部位再度复制繁殖，诱发组织的破坏、炎症和坏死。眼部HSV1原发感染临床较少见。HSV1眼部的复发感染，既是它的常见形式，又是导致失明的最主要原因。。HSV1角膜感染可引发不同的临床型，病变局限于角膜上皮的破坏，称为HSV1上皮型角膜炎[7]；病毒感染和破坏主要发生在基质，导致基质的炎症和坏死称为HSV1基质炎，病毒感染和破坏主要累及角膜内皮，称为HSV1角膜内皮炎。HSV1还可以诱发葡萄膜的炎症和破坏，称为HSV1葡萄膜炎[8]。HSV1还可导致急性视网膜坏死，后葡萄膜炎，以及HSV1脑膜炎[9]。

到目前为止，临床医生对于病毒感染性眼病的诊断依赖往往是经验性观察。缺乏病原学检测的诊疗过程，导致漏诊率和误诊率很高。而基于临床观察又缺乏精确病原学检测的治疗，缺乏精准性和病因针对性，根据表象的抗炎治疗有时候对疾病的转归和治疗效果反而是适得其反，让病毒繁殖-组织破坏-炎症加重进入恶性循坏之中，由此给患者的生命健康带来的严重后果，也增加的社会的医疗负担，更不利于医务人员科学地总结经验，提高认识和诊疗水平。以病毒性角膜炎为例，目前HSV1病毒性角膜炎的诊断是基于复发性角膜炎的病史以及眼部的典型临床表现而做出[10]。然而，由于HSV1病毒性角膜炎与其他微生物性引发的角膜炎临床特征有重叠，临床医生很难仅仅根据患者的临床表现就能够做出清晰而明确的辨析，完成准确的诊断，因此，唯有进行病原学的检测，才是实现清晰、明确诊断的最理想的手段。建立HSV1检测技术，还能为相关眼睛感染部位疾病的准确诊断和为精准治疗提供严谨科学的基础，避免疾病进展带来的破坏和导致并发症的风险。

传统的病毒检测方法包括病毒培养，免疫组化或者免疫荧光病毒抗原检测，感染标本的电子显微镜观察，还有通过血清的抗体检测间接推测是否有过病毒感染的方法。病毒培养分离虽然被认为是检测病毒感染的“金标准”，但它耗时，敏感性低，需要专门的实验室进行病毒培养和鉴定，成本高，耗费大，阳性检出率低，等。电子显微镜可对感染标本中存在的病毒进行物理形态学的观察，过程繁琐，代价高，需要专门的机构、设备和技术员才能实施，而且灵敏度低，容易发生抽样错误，假阴性高，仅适用于科研的观察，而不适合临床病原学的诊断。免疫学检测抗原法，特异性低，假阳性/假阴性高，对临床病原学诊断的价值比较低。血清学检测因为是间接推测，实际参考价值很低。