[发明专利]α-L-岩藻糖苷酶活性测定方法、α-L-岩藻糖苷酶诊断试剂及应用

说明书

本发明提供了一种α‑L‑岩藻糖苷酶活性测定方法、试剂及应用，涉及人体内酶含量的检测技术领域，具体方法包括：采用4‑氨基苯基β‑D‑吡喃半乳糖苷作为底物；加入α‑L‑岩藻糖苷酶，将4‑氨基苯基β‑D‑吡喃半乳糖苷水解生成对氨基酚；加入Cu²⁺、Ag⁺或Hg²⁺的中性溶液，反应一段时间；然后加入发光QDs，反应一段时间；利用分子荧光分光光度计检测反应后溶液的荧光信号，或者在365nm紫外灯照射下，裸眼读取溶液颜色变化。本发明中引入基于发光QDs选择性阳离子交换反应的信号放大技术及其溶液颜色裸眼可见特性，改善分析灵敏度；采用分子荧光分光光度计的荧光分析策略，需要样品量少，仪器分析速度快。

技术领域

本发明涉及人体内酶含量的检测技术领域，尤其是涉及α-L-岩藻糖苷酶活性测定方法及其应用。

背景技术

α-L-岩藻糖苷酶(α-L-Fucosidase，AFu)是一种催化含岩藻糖基的糖蛋白、糖脂等生物活性大分子水解酶的溶酶体酸性水解酶，分类名为α-L-岩藻糖苷岩藻糖水解酶(EC3.2.1.51)。其广泛分布于人体组织细胞、血液和体液中。参与体内糖蛋白、糖脂和寡糖的代谢。由于肝癌患者α-L-岩藻糖苷酶明显升高，它被认为是原发性肝癌的一种新的肿瘤标记物。

现有临床检验中主要是使用基于检测产物的紫外可见吸光度的CNPF底物法。其检测原理为：样品中的AFu催化MG-2-氯-对硝基苯酚-α-L-盐藻糖苷水解生成MG和2-氯-对硝基酚(CNP)，CNP形成的速率与AFu活性呈比例，在405nm处检测吸光度的变化率，即可计算出样品中AFu的活性。

上述临床检测方法主要存在以下缺陷：使用紫外可见分光光度计作为检测器，其检测灵敏度一般，易受检测介质干扰；难以实验可视化分析，仅仅可用于医院等检测机构。

发明内容

鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种α-L-岩藻糖苷酶活性测定方法，解决了现有技术中采用紫外可见分光光度计作为检测器，其检测灵敏度一般，易受检测介质干扰，以及难以实现可视化分析，仅仅可用于医院等检测机构的技术问题。

本发明的目的之二在于提供一种进行上述α-L-岩藻糖苷酶活性测定方法时利用的α-L-岩藻糖苷酶诊断试剂。

本发明的目的之三在于提供一种α-L-岩藻糖苷酶诊断试剂的应用。

为实现本发明目的之一，本发明一实施例提供了一种α-L-岩藻糖苷酶活性测定方法，包括以下步骤：

采用4-氨基苯基β-D-吡喃半乳糖苷作为底物；

加入α-L-岩藻糖苷酶的作用下，将4-氨基苯基β-D-吡喃半乳糖苷水解生成对氨基酚；

向溶液中加入Cu²⁺、Ag⁺或者Hg²⁺的中性溶液，反应一段时间；

然后加入发光QDs，反应一段时间；

利用分子荧光分光光度计检测反应后溶液的荧光信号，或者在365nm紫外灯照射下，裸眼读取溶液颜色变化。

优选地，所述发光QDs为CdTeQDs或者CdSeQDs。

优选地，所述CdTeQDs的制备方法包括以下步骤：

将CdCl₂和柠檬酸三钠溶解在水中，向以上溶液中加入巯基丙酸；

调节以上溶液pH至碱性；

然后，将Na₂TeO₃和KBH₄加入以上溶液中，回流，至溶液呈红色，在紫外灯下呈现出强烈的红色荧光；

最后，通过沉淀和离心纯化CdTeQDs溶液。