[发明专利]一种测定人血浆中舒尼替尼浓度的方法

权利要求书

1.一种测定人血浆中舒尼替尼浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、配置标准工作液：精确称取舒尼替尼标准品5mg置于5mL容量瓶，用50％甲醇的水溶液溶解并定容于5mL,得到标准储备液，将标准储备液用50％的甲醇进行稀释，分别在含有130-14000ng/mL舒尼替尼的浓度范围内配制出若干种标准工作液，并在-20℃条件下保存；

B、获取标准工作液的标准曲线方程，得到标准曲线方程为y＝a*x+b，其中a和b为权重系数；

C、处理待测血液样品：采集血样，并对血样进行离心处理，取离心后的上清液至于对应的无菌EP管中，标记后放置在-20℃的环境下保存；

D、制备进样品：取有机处理剂1000ul至无菌Ep管内，并添加400ul的上清液至该无菌EP管内，进行涡旋仪涡旋60s后，高速离心(145000rpm，8min)，用移液枪取上清液至进样瓶中，待进样分析；

E、定量测量血药的浓度：采用二维液相色谱法对进样品进行测定，得到舒尼替尼稳态血药的浓度。

2.根据权利要求1所述的测定人血浆中舒尼替尼浓度的方法，其特征在于，步骤B中获取标准工作液的标准曲线方程包括以下步骤：

B1、通过移液枪分别移取每种标准工作液100uL至对应的无菌EP管内，并在每种标准溶液中加入900uL的空白血浆混合制成不同的标准曲线血浆样品；

B2、对应每种标准曲线血浆样品，取有机处理剂1000ul至无菌EP管中，并添加400uL标准曲线血浆样品进行涡旋仪涡旋60s后，高速离心(145000rpm，8min)，分别用移液枪取上清液至进样瓶中得到待测样品；

B3、使用二维液相色谱仪对待测样品进行检测，得到舒尼替尼标准溶液色谱图，设每个舒尼替尼标准溶液浓度为横坐标X，每个舒尼替尼标准溶液峰面积为纵坐标Y，并进行线性回归拟合，拟合得到相应的标准曲线方程y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b。

3.根据权利要求1所述的测定人血浆中舒尼替尼浓度的方法，其特征在于，步骤C中处理待测血液样品包括以下步骤：

C1、采集服用舒尼替尼药物后的血样，其采血的时间为患者口服舒尼替尼达到稳态后，当日未服药，距前次用药时间(24±2-3)h，且当日未服；

C2、预设离心机参数，并将配平的离心管对称放于离心机离心；通过移液枪将上清液移至2ml无菌EP管中，并做好标记；离心后血清放置-20℃冰箱保存。

4.根据权利要求1所述的测定人血浆中舒尼替尼浓度的方法，其特征在于，步骤E中的二维液相色谱法所使用的一维萃取柱(LC1 Column)为Aston SX1(3.5*25mm,5μm)；中间柱为Aston SCB(4.6*10mm,3.5μm)；二维分析柱(LC2 Column)为Aston SCB(4.6*125mm,5μm)。

5.根据权利要求4所述的测定人血浆中舒尼替尼浓度的方法，其特征在于，将步骤E中的二维液相色谱法的一维萃取柱的柱温、中间柱的柱温和二维分析柱的柱温均设置为40℃；流速为1.20ml/min；进样体积：500μL。

6.根据权利要求5所述的测定人血浆中舒尼替尼浓度的方法，其特征在于，步骤E中的二维液相色谱法所使用的一维色谱柱流动相为甲醇：乙腈：磷酸铵水溶液＝(5-25):(5-25):(55-90)；以磷酸水溶液调节pH至3.0～7.0；中间柱流动相为纯水；二维色谱柱流动相为含有甲醇、乙腈和磷酸铵水溶液的溶液，其中，甲醇：乙腈:磷酸铵水溶液＝(20-45):(25-65):(5-40)，V/V，以磷酸水溶液调节pH至3.5～6.5，并加入1％的柠檬酸铵；其中流动相流速为1.20mL/min，进样量为500μL。

7.根据权利要求6所述的测定人血浆中舒尼替尼浓度的方法，其特征在于，所述甲醇、乙腈和磷酸铵水溶液之间的比值为体积之比。