[发明专利]一种NT-proBNP检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种NT‑proBNP检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括(1)磁微粒偶联的NT‑proBNP单克隆抗体，所述NT‑proBNP单克隆抗体的表位处于42～46所包含的氨基酸区域内；(2)碱性磷酸酶标记的NT‑proBNP单克隆抗体：采用碱性磷酸酶标记的表位处于13～24所包含的氨基酸区域内的第一NT‑proBNP单克隆抗体和表位处于63～71所包含的氨基酸区域内的第二NT‑proBNP单克隆抗体；该试剂盒正确度结果相对偏差应在±10.0％范围内，精密度变异CV(％)均小于5％，检测下限为5.00pg/mL，与罗氏的NT‑proBNP试剂盒的线性相关系数r≥0.975。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种NT-proBNP检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

1988年，日本学者首次从猪脑内分离得到一种具有强力的利钠、利尿、扩血管和降压作用的多肽，命名为脑钠肽或称钠尿肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)。当心肌细胞受刺激后，会产生含134个氨基酸的B型利钠肽原前体(pre-proBNP)，随后在相关酶的作用下切掉N端的信号肽序列，形成含108个氨基酸的BNP前体(proBNP)，后者在内切酶的作用下裂解为含有76个氨基酸、无生物活性的N端产物--N末端B型脑利钠肽前体(NT-proBNP)和含有32个氨基酸、有活性的C端产物--B型利钠肽(BNP)。美国在2004年和2008年分别发表了BNP临床应用专家共识和国际NT-proBNP专家共识，系统阐述了BNP和NT-proBNP的生物学和临床应用，已经被各级医院和医师广泛用于临床实践，成为心血管病尤其是心力衰竭诊断和评估十分有用的生物标志物。但BNP半衰期短(22min)，体外稳定性差，而NT-proBNP半衰期相对较长(120min)，体外稳定性相对更强，在心力衰竭患者中的浓度也较BNP高，在有些情况下更有利于心力衰竭的诊断。

目前用于检测NT-proBNP含量的方法主要由金标定性试验、荧光免疫法、联免疫吸附试验(ELISA)和磁微粒化学发光免疫测定法(CLIA)。CLIA法灵敏度高、线性范围广、定量检测结果精确、误差小、自动化程度高、操作简便，检测速度快，一般30min内，甚至15min内出结果。但现有的NT-proBNP检测试剂盒普遍存在灵敏度不高的问题。

因此，如何开发一种灵敏度高的NT-proBNP检测试剂盒，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明目的是提供一种NT-proBNP检测试剂盒及其制备方法，检测灵敏度高，抗干扰能力强。

为了实现上述目的，本发明提供了一种NT-proBNP检测试剂盒，所述试剂盒包括磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体和碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体；

所述磁微粒偶联的NT-proBNP单克隆抗体中NT-proBNP单克隆抗体的表位处于42～46所包含的氨基酸区域内；

所述碱性磷酸酶标记的NT-proBNP单克隆抗体包括均采用碱性磷酸酶标记的第一NT-proBNP单克隆抗体和第二NT-proBNP单克隆抗体，所述第一NT-proBNP单克隆抗体表位处于13～24所包含的氨基酸区域内，所述第二NT-proBNP单克隆抗体表位处于63～71所包含的氨基酸区域内。

进一步地，所述磁微粒表面的活性基团为-COOH或-NH₂，所述磁微粒的大小为0.8μm～3μm。

进一步地，所述磁微粒的浓度为2～8mg/mL，所述NT-proBNP单克隆抗体浓度为20～500ug/mL。

进一步地，所述第一NT-proBNP单克隆抗体和所述第二NT-proBNP单克隆抗体的浓度均为600～1200ug/mL。