[发明专利]一种提高乳酰-N-三糖II产量的基因工程菌及生产方法有效
| 申请号： | 202010834657.3 | 申请日： | 2020-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN111979168B | 公开（公告）日： | 2022-07-22 |
| 发明（设计）人： | 沐万孟;张文立;朱莺莺;万李 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N9/90;C12N9/12;C12N9/10;C12N9/38;C12N9/78;C12P19/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 ii 产量 基因工程 生产 方法 | ||
1.一种重组大肠杆菌，其特征在于，为(a)或(b)或(c)：
(a)沉默UDP-N-乙酰葡萄糖胺-2-差向异构酶的表达，并过表达葡萄糖胺合成酶、UDP-乙酰葡萄糖胺焦磷酸化酶和葡萄糖胺-6-磷酸合成酶和β-1,3-乙酰葡萄糖胺转移酶；
(b)沉默UDP-N-乙酰葡萄糖胺-2-差向异构酶、葡萄糖胺-6磷酸脱氨酶，并过表达葡萄糖胺合成酶、UDP-乙酰葡萄糖胺焦磷酸化酶和葡萄糖胺-6-磷酸合成酶和β-1,3-乙酰葡萄糖胺转移酶；
(c)沉默UDP-N-乙酰葡萄糖胺-2-差向异构酶、葡萄糖胺-6磷酸脱氨酶和β-半乳糖苷酶的表达，并过表达葡萄糖胺合成酶、UDP-乙酰葡萄糖胺焦磷酸化酶和葡萄糖胺-6-磷酸合成酶和β-1,3-乙酰葡萄糖胺转移酶；
以pRSFDuet-1表达葡萄糖胺合成酶的编码基因、以及UDP-乙酰葡萄糖胺焦磷酸化酶和葡萄糖胺-6-磷酸合成酶的编码基因，以pETDuet-1表达β-1,3-乙酰葡萄糖胺转移酶的编码基因；所述葡萄糖胺合成酶、UDP-乙酰葡萄糖胺焦磷酸化酶和葡萄糖胺-6-磷酸合成酶的编码基因来源于大肠杆菌K-12；β-1,3-乙酰葡萄糖胺转移酶的编码基因来源于脑膜炎奈瑟球菌；将载体pRSFDuet-1上的核糖体结合位点替换为RBS 29。
2.构建权利要求1所述的重组大肠杆菌的方法，其特征在于，先在大肠杆菌基因组中敲除UDP-N-乙酰葡萄糖胺-2-差向异构酶、葡萄糖胺-6磷酸脱氨酶、和/或β-半乳糖苷酶的编码基因，再利用表达载体，过表达葡萄糖胺合成酶、UDP-乙酰葡萄糖胺焦磷酸化酶和葡萄糖胺-6-磷酸合成酶的编码基因，并表达β-1,3-乙酰葡萄糖胺转移酶的编码基因。
3.一种高效生产乳酰-N-三糖II的方法，其特征在于，利用权利要求1所述重组大肠杆菌发酵生产乳酰-N-三糖II。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，以乳糖为底物，以甘油作为碳源，转化生产乳酰-N-三糖II。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，发酵40～60h。
6.权利要求1所述重组大肠杆菌，或权利要求3～5任一所述方法在制备乳酰-N-三糖II中的应用。
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