[发明专利]同时检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7/NM的Taqman探针引物组及其试剂盒

说明书

本发明涉及病菌检测技术领域，具体涉及一种同时检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7/NM的Taqman探针引物组及其试剂盒。一种同时检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7/NM的Taqman探针引物组，包括3对特异性引物，分别是引物对invA‑F和invA‑R、引物对ropB‑F和ropB‑R、引物对rfbE‑F和rfbE‑R，其分别具有如SEQ ID No.1至SEQ ID No.6所示的序列。本发明对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157:H7/NM三种致病菌分别设计特异性的引物和探针，并通过条件优化，在一次扩增中同时对上述三种致病菌进行检测，为传统检测方法提供有力补充，提升了检测效率，且检测准确度高，实用性强，保障了食品安全。

技术领域

本发明涉及病菌检测技术领域，具体涉及一种同时检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7/NM的Taqman探针引物组及其试剂盒。

背景技术

2014年7月1日实施的《GB29921-2013食品安全国家标准食品中致病菌限量》对肉制品、粮食制品、即时豆类制品等常见的11大类、22小类食品须检测的致病菌指标做出了明确规定，其中须同时检测沙门氏菌和金黄色葡萄球菌2项指标的有8大类食品，占比72％。大肠菌群是最常见的食品卫生学指标、也是食品污染最普遍的因素之一，而大肠埃希氏菌O157:H7/NM是大肠菌群中的一种高致病性微生物，具有肠出血性危害，国标要求在牛肉制品及生食果蔬中必须检测。可见，上述三种致病菌是食品生物性危害中最具代表性的几个因素，具有普遍性，对食品安全有一定的指征意义；加强上述三种致病性的检测对监测食品安全、防止群体规模食品安全事件有重要意义。

目前，上述三种致病菌的国标检测方法主要是采用增菌、选择性培养、生化鉴定的方法，可靠性较高；但检测周期较长，一般需要2-4天，步骤繁琐，效率较低。Taqman探针荧光PCR法是以基因片段为靶标，依靠引物与探针的特异性结合以判断是否为目标微生物，具有准确度、精确度高、耗时少等特点，能较显著地提升检测效率，在大批量筛查、应急事件处理有明显优势。目前，荧光PCR法已在临床检测、遗传病筛查、食品过敏原检测、转基因成分检测等领域有较多研究和应用，多为单一基因序列扩增；采用荧光探针、同时扩增三种基因序列的荧光PCR方法还鲜见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种同时检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7/NM的Taqman探针引物组及其试剂盒，以解决现有该三种致病菌的检测周期周期长，步骤繁琐，效率低的问题。为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

一种同时检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7/NM的Taqman探针引物组，包括3对特异性引物，分别是引物对invA-F和invA-R、引物对ropB-F和ropB-R、引物对rfbE-F和rfbE-R，其分别具有如SEQ ID No.1至SEQ ID No.6所示的序列。

作为优选，所述引物对invA-F和invA-R、引物对ropB-F和ropB-R、引物对rfbE-F和rfbE-R对应的探针分别为invA-P、ropB-P和rfbE-P。

本发明还提供了同时检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7/NM的Taqman探针试剂盒，所述Taqman探针试剂盒20μL，含有Premix Ex Taq(2×)10μL、模板1μL、参比荧光剂ROX(5×)0.5μL、3对特异性引物及其探针3.3μL，余量为去离子水，其中所述的3对特异性引物分别是引物对invA-F和invA-R、引物对ropB-F和ropB-R、引物对rfbE-F和rfbE-R，其分别具有如SEQ ID No.1至SEQ ID No.6所示的序列；探针分别为invA-P、ropB-P和rfbE-P。