[发明专利]一种用高效液相色谱测定帕拉米韦中间体异构体的方法

权利要求书

1.一种用高效液相色谱测定帕拉米韦中间体异构体的方法，包括以下步骤：其特征在于：

步骤一，溶液配置：

分别取帕拉米韦中间体的三种异构体，即杂质 A、杂质B和杂质C ，用异丙醇和正己烷配制 杂质A定位溶液、杂质B定位溶液和杂质C定位溶液，所述杂质 A 定位溶液、杂质 B定位溶液、杂质C定位溶液的浓度为0.05~5 mg/ml ，且三者的浓度相同；

取帕拉米韦中间体、杂质 A定位溶液、杂质B定位溶液和杂质C定位溶液，用异丙醇和正己烷配制 得到系统适用性溶液，所述系统适用性溶液中，帕拉米韦中间体、杂质A、杂质B、杂质C的浓度为0. 05~5 mg/ml；

取帕拉米韦中间体粗样品，用异丙醇和正己烷配制 得到供试品溶液；

其中，帕拉米韦中间体的化学结构式为式(1)：；杂质A的化学结构式为式(2)：；杂质B的化学结构式为式(3)：；杂质C的化学结构式为式(4)：；

步骤二，仪器和程序的准备工作：

采用带有紫外检测器的高效液相色谱仪；

安装规格为4.6×250mm，5μm的正相多糖衍生物涂敷型手性色谱柱；

配置异丙醇和正己烷体积比为10:90的混合溶液作为流动相；

设置等度洗脱；

流动相的流速设置为 0.8~1.0 ml/min；

设置检测 波长为215nm；

柱温采用25℃~ 35℃；

步骤三，进样检测：采用自动进样或手动进样，分别将杂质 A定位溶液、杂质B定位溶液、杂质C定位溶液、系统适用性溶液、供试品溶液进样检测，分别得到杂质 A定位溶液谱图、杂质B定位溶液谱图、杂质 C定位溶液谱图、系统适用性溶液谱图、供试品溶液谱图；

步骤四，数据处理：

定性分析：根据杂质 A定位溶液谱图、杂质B定位溶液谱图、杂质 C定位溶液谱图，得到杂质A 的保留时间、杂质B的保留时间、杂质C的保留时间，将系统适用性溶液谱图、供试品溶液谱图中的各个峰进行归属，判断供试品溶液中含有的帕拉米韦中间体异构体；

定量分析：根据供试品谱图中帕拉米韦中间体、杂质 A 、杂质B 、杂质C的峰面积或峰高，用归一化法计算各组分的含量；

其中，步骤一和步骤二没有先后顺序。

2.根据权利要求 1所述的方法，其特征在于：所述帕拉米韦中间体粗样品在供试品溶液中的浓度为0.7~5 mg/ml 。

3.根据权利要求 1所述的方法，其特征在于：步骤一还包括空白溶液的配制 ，所述空白溶液是流动相所用的同种异丙醇和正己烷的混合溶液。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤三还包括空白溶液的进样检测，得到空白溶液谱图。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤四还包括分析空白溶液谱图，该空白溶液谱图中的峰为溶剂峰，进行定量分析时，忽略所述溶剂峰在供试品溶液谱图中的峰面积或峰高。