[发明专利]肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法

说明书

本发明涉及一种肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法，它是利用PBS缓冲溶液快速解冻冰冻切片后的剩余肾组织并溶解OCT胶后，重新制成石蜡切片，利用该石蜡切片行特殊染色并进行光镜检查，以弥补光镜检查无肾小球或肾小球过少的情况，本发明步骤简单、操作快捷方便、染色效果佳，能够有效避免患者二次肾活检，减少患者痛苦及经济负担。

技术领域

本发明涉及肾脏病理检查技术领域，具体涉及一种利用肾活检免疫荧光OCT胶包埋冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法。

背景技术

肾活检是肾脏病的诊断的金标准，全称为“肾穿刺活检术”，通常情况下叫做肾穿刺。由于肾脏疾病的种类繁多，病因及发病机制复杂，许多肾脏疾病的临床表现与肾脏的组织学改变并不完全一致。为了明确疾病的病理，进一步确诊患者所患的具体病种，这时就需要做肾穿刺活检术！肾活检的方法是采用肾穿刺针从肾脏取下一条或几条小的组织，通过病理检查，以对肾脏疾病做出正确的诊断。

目前，肾穿刺取出肾组织后，一般分为三部分，一部分肾组织制作成石蜡切片，用于光学显微镜（光镜）检查；一部分肾组织经OCT包埋后迅速冰冻，之后再制成冰冻切片经免疫荧光染色，用于免疫病理检查；另一部分肾组织经戊二醛固定液固定后，用于电子显微镜（电镜）检查，其中，用于免疫病理检查用的冰冻切片紧紧为该冰冻组织的一部分，剩余冰冻组织冰冻存储，目前，光镜检查、免疫病理检查及电镜检查对于肾脏病理诊断缺一不可，尤其是光镜检查最为重要，直接影响患者最终病理诊断。

光镜检查，需要将肾组织制作成石蜡切片，实际工作中光镜检查用的石蜡切片会出现无肾小球或肾小球数量过少的情况，直接影响肾活检病理的诊断工作及准确性，进而影响临床工作的进行，无法根据病人确切的病理情况制定准确的治疗方案。如果需要确诊，患者必须接受二次肾活检，这给患者的精神和经济都带来巨大压力。

发明内容

综上所述，为了克服现有技术问题的不足，本发明提供了一种肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法，它是通过解冻冰冻切片后的剩余肾组织并溶解OCT胶后，重新制成石蜡切片，利用该石蜡切片行特殊染色并进行光镜检查，以弥补光镜检查无肾小球或肾小球过少的情况，从而避免患者二次肾活检，减少患者痛苦及经济负担。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法，其中：包括以下步骤：

第一步、肾活检免疫荧光冰冻剩余组织储存

肾穿刺取出的一部分肾组织，经OCT胶包埋后，及时迅速利用冰冻切片机对冰冻肾组织进行切片供免疫荧光标记染色，剩余未切片的冰冻肾组织，快速用OCT胶再次封闭包埋放入冻存管中-80℃超低温冰箱储存；

第二步、制作石蜡切片

（1）解冻冰冻肾组织并溶解OCT胶

将第一步储存在-80℃超低温冰箱内的冰冻肾组织取出，室温条件下，迅速放入PBS缓冲溶液中，使冰冻肾组织解冻并快速充分溶解OCT胶；

（2）固定

将肾组织从PBS缓冲溶液中取出，迅速放入10%中性缓冲甲醛固定液中固定，固定2~4小时；

（3）脱水

将固定后的肾组织放入梯度酒精内进行脱水处理；

（4）透明

利用二甲苯对脱水后的肾组织进行透明处理；

（5）浸蜡

将透明处理后的肾组织放入熔化的石蜡液中浸渍2小时；

（6）包埋