[发明专利]肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法

权利要求书

1.一种肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法，其特征在于：包括以下步骤：

第一步、肾活检免疫荧光冰冻剩余组织储存

肾穿刺取出的一部分肾组织，经OCT胶包埋后，及时迅速利用冰冻切片机对冰冻肾组织进行切片供免疫荧光标记染色，剩余未切片的冰冻肾组织，快速用OCT胶再次封闭包埋放入冻存管中-80℃超低温冰箱储存；

第二步、制作石蜡切片

（1）解冻冰冻肾组织并溶解OCT胶

将第一步储存在-80℃超低温冰箱内的冰冻肾组织取出，室温条件下，迅速放入PBS缓冲溶液中，使冰冻肾组织解冻并快速充分溶解OCT胶；

（2）固定

将肾组织从PBS缓冲溶液中取出，迅速放入10%中性缓冲甲醛固定液中固定，固定2~4小时；

（3）脱水

将固定后的肾组织放入梯度酒精内进行脱水处理；

（4）透明

利用二甲苯对脱水后的肾组织进行透明处理；

（5）浸蜡

将透明处理后的肾组织放入熔化的石蜡液中浸渍2小时；

（6）包埋

将肾组织从熔化的石蜡液中取出，并将其迅速贴附于包埋盒内，石蜡液包埋后置于速冻台上，使石蜡凝固；

（7）石蜡切片

采用石蜡切片机将石蜡包埋的肾组织切片，切片厚度2μm，将石蜡切片放入恒温水浴锅内展片，恒温水浴锅温度控制在45~48℃，之后将石蜡切片从水浴锅内捞出，放入干燥箱内烤片，干燥箱设定烤片温度70-80℃，烤片时间为30~40分钟；

（8）染色

对步骤（7）中烤片后的石蜡切片进行特殊染色处理；

（9）脱水

先将步骤（8）中染色后的石蜡切片放入无水乙醇中浸泡，对石蜡切片进行脱水处理；

（10）透明与封片

将脱水后的石蜡切片放入二甲苯中浸泡，之后，采用全自动封片机将石蜡切片直接封片；至此完成石蜡切片的制作。

2.根据权利要求1所述的肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法，其特征在于：第二步、制作石蜡切片的步骤（1）中，所述的PBS缓冲液pH值为7.2-7.6。

3.根据权利要求1所述的肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法，其特征在于：第二步、制作石蜡切片的步骤（1）中，准备三个装有PBS缓冲液的容器，将冰冻肾组织依次浸没在三个容器内的PBS缓冲液中，每个容器浸泡一分钟。

4.根据权利要求1所述的肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法，其特征在于：第二步、制作石蜡切片的步骤（2）中，所述的10%中性缓冲甲醛包括磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、甲醛溶液及蒸馏水，配置时，先将0.4g磷酸二氢钠与0.65g磷酸氢二钠充分溶解于100ml蒸馏水中制成混合溶液，然后将10ml甲醛溶液加入到混合溶液中并混合均匀。

5.根据权利要求1所述的肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法，其特征在于： 第二步、制作石蜡切片的步骤（3）中，准备装有70%酒精的容器A，准备装有80%酒精的容器B，准备装有90%酒精的容器C，准备装有95%酒精的容器D，准备装有95%酒精的容器E，准备装有无水乙醇的容器F，准备装有无水乙醇的容器G，将固定后的肾组织依次浸泡在容器A、容器B、容器C、容器D、容器E、容器F、容器G中，每个容器浸泡30分钟。

6.根据权利要求1所述的肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法，其特征在于： 第二步、制作石蜡切片的步骤（4）中，准备两个装有二甲苯的容器，将脱水后的肾组织依次浸泡在两个容器中的二甲苯内，每个容器浸泡10分钟。

7.根据权利要求1所述的肾活检免疫荧光冰冻剩余组织重制石蜡切片的方法，其特征在于： 第二步、制作石蜡切片的步骤（5）中，准备三个装有石蜡液的容器，将脱水后的肾组织依次浸泡在三个容器内的石蜡液中，每个容器浸泡40分钟。