[发明专利]一种利用复合菌种发酵生产阿维菌素的方法

说明书

本发明公开了一种利用复合菌种发酵生产阿维菌素的方法，本发明在采用气升式环流反应器作为发酵容器的同时采用阿维链霉菌和顶头孢霉菌的复合菌株进行发酵培养生产阿维菌素，有效降低了发酵培养过程中的COD，显著增加了发酵液中阿维菌素的效价。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，尤其涉及到一种利用复合菌种发酵生产阿维菌素的方法。

背景技术

阿维菌素Avermectins是具有杀虫、杀螨、杀线虫活性的一簇结构相似的十六元大环内酯类抗生素，由链霉菌中灰色链霉菌Streptomyces avermitilis发酵产生。天然阿维菌素含有结构相近的8个同系物组分，主要4种有A1a、A2a、B1a和B2a，其总含量≥80％；对应的4个比例较小的同系物是A1b、A2b、B1b和B2b，其总含量≤20％。阿维菌素广泛应用于农业，是一种常见的农药品种，作为杀虫剂，用于防治十字花科小菜蛾、棉铃虫、螨类、菜青虫等。

在本发明的在先申请CN109517865A中，提出利用气升式环流反应器分批补料发酵生产阿维菌素的方法。其包含以下步骤：将阿维链霉菌接种至斜面培养基培养，取孢子斜面，制备成孢子悬浮液；将孢子悬浮液接种到种子培养基，培养至对数生长期；将培养至对数生长期的阿维链霉菌孢子悬浮液移种至装有发酵培养基的气升式环流反应器中进行发酵培养，发酵中后期分批添加补料培养基。在该发明专利申请中，只提及了采用阿维链霉菌进行发酵，由此所得到的发酵液中阿维菌素的效价约为6000-6300mg/L，其仍然有进一步改善的空间。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供一种利用复合菌种发酵生产阿维菌素的方法，该方法充分利用复合菌种的发酵能力，有效降低了发酵过程中的COD的排放，且使得阿维菌素的发酵效价得到明显提升，极大的降低了生产成本。

如本文所用，除非特别指出，则“约”是指±10％范围内。

具体而言，本发明中利用复合菌种发酵生产阿维菌素的方法，包括以下步骤：

步骤1，将阿维链霉菌和顶头孢霉菌分别接种至斜面培养基培养，取孢子斜面，分别制备成阿维链霉菌孢子悬浮液和顶头孢霉菌孢子悬浮液；

步骤2，将步骤1中得到的阿维链霉菌孢子悬浮液和顶头孢霉菌孢子悬浮液混合液接种到种子培养基，培养至对数生长期得到复合菌种悬液；

步骤3，将步骤2中培养至对数生长期的复合菌种悬液移种至发酵培养基进行发酵培养；

所述步骤3中发酵培养的反应器为气升式环流反应器，发酵方式为分批补料发酵。

进一步的，所述步骤2中阿维链霉菌孢子悬浮液和顶头孢霉菌孢子悬浮液混合液含有0.9-1.5×10⁸个/ml阿维链霉菌孢子菌和1.1-0.5×10⁸个/ml顶头孢霉菌孢子菌。

进一步的，所述斜面培养基包含葡萄糖、琼脂粉、牛肉膏和磷酸二氢钾；

进一步的，斜面培养基包含5-50g/L葡萄糖、5-50g/L琼脂粉、5-50g/L牛肉膏和0.1-2g/L磷酸二氢钾；优选的，所述斜面培养基包含5-30g/L葡萄糖、5-30g/L琼脂粉、5-30g/L牛肉膏和0.1-1g/L磷酸二氢钾；更优选的，所述斜面培养基包含15-30g/L葡萄糖、15-30g/L琼脂粉、5-10g/L牛肉膏和0.5-1g/L磷酸二氢钾；

进一步的，所述斜面培养基的pH为6.0-8.0；优选为6.5-8.0；优选为6.5-7.5；优选为7-7.5；更优选为7-7.2；

进一步的，所述斜面培养基的灭菌条件为115-125℃，20-35min，灭菌压力为0.05-0.3Mpa；优选为115-121℃，20-30min，灭菌压力为0.05-0.2Mpa；更优选为121℃，30min，灭菌压力为0.15Mpa；