[发明专利]基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法

说明书

本申请提供了一种基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，其包括如下步骤：提供功能酶活性探针，将所述功能酶活性探针与宏蛋白质组样品孵育得到第一混合物；将所述第一混合物依次进行纯化处理、消化处理得到第一样品蛋白肽段；将所述第一样品蛋白肽段进行液相色谱串联质谱分析，得到第一样品蛋白肽段质谱数据；将所述第一样品蛋白肽段质谱数据与所述宏蛋白质组样品的蛋白质序列数据库进行匹配分析，筛选目标功能酶，鉴定得到所述功能酶，该方法直接在分子水平上对功能酶进行筛选，无须进行菌株的分离和体外培养，简化了目标功能酶的筛选流程、缩短了筛选的时间并提高了效率。

技术领域

本申请属于生物技术领域，尤其涉及一种基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法。

背景技术

酶是一类生物催化剂，它们支配着生物的新陈代谢、营养和能量转换等许多催化过程，与生命过程关系密切的反应大多是酶催化反应。酶的这些性质使细胞内错综复杂的物质代谢过程能有条不紊地进行，使物质代谢与正常的生理机能互相适应。酶使人体所进食的食物得到消化和吸收，并且维持内脏所有功能包括：细胞修复、消炎排毒、新陈代谢、提高免疫力、产生能量、促进血液循环。

酶能加快化学反应的速度，酶在促进正向反应的同时也以相同的比例促进逆向的反应，酶的作用是缩短了到达平衡所需的时间；此外，酶还具有高效性、专一性、多样性、温和性、活性可调节性等多种特性，适用于各个方面。

目前，一直以来筛选功能酶所用的方法，主要是分离与培养单个菌株并从中纯化出目标酶，在体外用底物法检测其活性，该技术首先需要从复杂样本中分离合适的菌株，并且筛选出来的菌株体外培养条件需要摸索与优化，然而多数菌株的培养条件苛刻。所以通过这种分离菌株的方法来寻找相应的目标酶，是一种工作量大，而且性价比不高的研究方式，但是在过去相当长一段时期里，是唯一的选择。因此，这一工作流程也伴随着大量的蛋白质纯化工作，需要将可以有效切割目标糖的菌株中的多种糖苷酶分别进行纯化，从中筛选活性正确的目标酶类。完成这一过程，同样需要花费大量的时间和金钱，目前，筛选功能酶的方法冗杂、时间长且效率低。

发明内容

本申请的目的在于提供一种基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，旨在解决现有技术中筛选功能酶的方法冗杂、时间长且效率低的问题。

为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：

第一方面，本申请提供一种基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，包括如下步骤：

提供功能酶活性探针，将所述功能酶活性探针与宏蛋白质组样品孵育得到第一混合物；

将所述第一混合物依次进行纯化处理、消化处理得到第一样品蛋白肽段；

将所述第一样品蛋白肽段进行液相色谱串联质谱分析，得到第一样品蛋白肽段质谱数据；

将所述第一样品蛋白肽段质谱数据与所述宏蛋白质组样品的蛋白质序列数据库进行匹配分析，筛选目标功能酶，鉴定得到所述功能酶。

本申请第一方面提供的基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，该方法基于活性蛋白表达谱技术(ABPP)，利用功能酶活性探针对宏蛋白质组进行标记，通过亲和纯化将样品蛋白富集，经过消化处理后将样品蛋白肽段进行质谱分析，得到的质谱数据与宏蛋白质组样品的蛋白数据库进行比对，进一步筛选目标蛋白，进行鉴定，得到所述功能酶。该方法直接在分子水平上基于活性蛋白表达谱技术对功能酶进行筛选，无须进行菌株的分离和体外培养，简化了目标功能酶的筛选流程、缩短了筛选的时间并提高了效率。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。