[发明专利]基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法

权利要求书

1.一种基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：

提供功能酶活性探针，将所述功能酶活性探针与宏蛋白质组样品孵育得到第一混合物；

将所述第一混合物依次进行纯化处理、消化处理得到第一样品蛋白肽段；

将所述第一样品蛋白肽段进行液相色谱串联质谱分析，得到第一样品蛋白肽段质谱数据；

将所述第一样品蛋白肽段质谱数据与所述宏蛋白质组样品的蛋白质序列数据库进行匹配分析，筛选目标功能酶，鉴定得到所述功能酶。

2.如权利要求1所述的基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，其特征在于，所述功能酶活性探针包括反应基团、连接基团和报告基团。

3.如权利要求2所述的基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，其特征在于，所述反应基团选自与所述功能酶特异性结合的基团；和/或，

所述连接基团选自酰胺基、醚基、酯基的至少一种；和/或，

所述报告基团选自生物素。

4.如权利要求1～3任一所述的基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，其特征在于，所述功能酶活性探针的浓度为1～1.5μmol/L。

5.如权利要求1～3任一所述的基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，其特征在于，所述宏蛋白质组样品的浓度为5～7mg/mL。

6.如权利要求1～3任一所述的基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，其特征在于，将所述功能酶活性探针与宏蛋白质组样品孵育得到第一混合物的步骤中，将所述功能酶活性探针与宏蛋白质组样品于37～38℃、pH 6.0～6.5的条件下孵育30～35分钟得到第一混合物。

7.如权利要求1～3任一所述的基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，其特征在于，纯化处理的步骤中，提供亲和分子，使亲和分子与功能酶活性探针中的报告基团特异性结合，进行亲和纯化处理。

8.如权利要求7所述的基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，其特征在于，所述亲和分子选自链霉亲和素磁珠。

9.如权利要求1～3任一所述的基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，其特征在于，鉴定得到所述功能酶的步骤中，包括：采用基因工程技术将所述目标功能酶进行重组表达得到重组目标功能酶，并对所述重组目标功能酶进行酶活力鉴定，鉴定得到所述功能酶。

10.如权利要求9所述的基于活性蛋白表达谱技术筛选功能酶的方法，其特征在于，采用基因工程技术将所述目标功能酶进行重组表达得到重组目标功能酶的步骤中，包括：根据所述目标功能酶的基因序列，采用质粒库构建重组质粒；将重组质粒转化至工程大肠杆菌中进行表达，收集菌液制备重组目标功能酶样品；将所述重组目标功能酶样品纯化得到目标功能酶。