[发明专利]一种用于待测样品间麦角硫因含量高低的高通量检测方法及其应用

权利要求书

1.一种用于待测样品间麦角硫因含量高低的高通量检测方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)取硫氰酸铁试剂，按照固液比g/mL 0.1～0.3：10加入无水乙醇溶解，过膜，制得硫氰酸铁溶液；

(2)将待测样品调节pH 1.9～2.0，先加入硫氰酸铁溶液于酶标板中，再加入待测样品，吹打混合；使用酶标仪记录吸光度，酶标仪所用波长为450nm～470nm；吸光度越低，麦角硫因含量越高；所述的待测样品为灵芝菌丝提取液；

步骤(2)中所述的硫氰酸铁溶液与待测样品的体积比为0.5～2.5。

2.根据权利要求1所述的用于待测样品间麦角硫因含量高低的高通量检测方法，其特征在于：

步骤(1)中，按照固液比g/mL 0.1：10加入无水乙醇溶解；

步骤(1)中所述的过膜为过膜0.22μm；

步骤(2)中所述的酶标板为96孔酶标板；

步骤(2)中所述的硫氰酸铁溶液与待测样品的体积比为0.7～1：10；

步骤(2)中所述的酶标仪所用波长为450nm。

3.根据权利要求1所述的用于待测样品间麦角硫因含量高低的高通量检测方法，其特征在于：

所述的灵芝菌丝提取液的制备方法，包括如下步骤：

(A)收集灵芝菌丝体；

(B)灵芝菌丝提取液的制备：称取步骤(A)的灵芝菌丝体，加入60～70％乙醇，水浴，然后常温离心，收集上清液，即灵芝菌丝粗提液；然后在灵芝菌丝粗提液中，按照固液比g/mL0.8～2：10加入预处理大孔树脂NKA-9，放置处理；常温离心，收集上清液，即灵芝菌丝提取液。

4.根据权利要求3所述的用于待测样品间麦角硫因含量高低的高通量检测方法，其特征在于：

步骤(B)中，

灵芝菌丝体与60～70％乙醇的比值为1g：100～200mL；

所述的水浴的条件为50～60℃水浴0.5～1.5h；

所述的放置处理的条件为28～30℃、150～200rpm，放置3～4h。

5.根据权利要求3或4所述的用于待测样品间麦角硫因含量高低的高通量检测方法，其特征在于：

步骤(B)中，

灵芝菌丝体与60～70％乙醇的比值为1g：100mL；

所述的水浴的条件为53℃水浴1h；

按照固液比g/mL 1：10加入预处理大孔树脂NKA-9；

所述的放置处理的条件为28℃、150～200rpm，放置3h。

6.根据权利要求3所述的用于待测样品间麦角硫因含量高低的高通量检测方法，其特征在于：

步骤(A)中所述的灵芝菌丝体的制备方法，包括如下步骤：

将灵芝按照5％v/v的接种量接种于液体发酵培养基中，培养，离心收集菌丝体，冻干，研磨成粉末，置于干燥箱保存；

步骤(B)中，所述的大孔树脂NKA-9的预处理方法，包括如下步骤：

使用三级水冲洗大孔树脂NKA-9，直到静置后水呈清澈透明，无乳白色，抽滤，使用无水乙醇浸泡大孔树脂；使用三级水冲洗大孔树脂，直到无明显醇味，抽滤，使用质量分数3～5％HCl浸泡大孔树脂；使用三级水冲洗大孔树脂，直到pH呈中性，抽滤，使用质量分数3～5％NaOH浸泡大孔树脂；使用三级水冲洗大孔树脂，直到pH呈中性，抽滤，得到预处理大孔树脂NKA-9。

7.根据权利要求6所述的用于待测样品间麦角硫因含量高低的高通量检测方法，其特征在于：

所述的培养的条件为25～28℃，转速150～200rpm，培养10～15天；

所述的冻干的时间为24～36h；

所述的浸泡的条件均为4～25℃浸泡4～12h。

8.权利要求1～7任一项所述用于待测样品间麦角硫因含量高低的高通量检测方法在筛选高产麦角硫因的食药用菌菌株中的应用。