[发明专利]一种检测非洲猪瘟病毒黏膜sIgA抗体的量子点微球免疫层析试纸条及其应用

说明书

本发明提供一种检测非洲猪瘟病毒黏膜sIgA抗体的量子点微球免疫层析试纸条及其应用，属于兽医生物诊断制品领域。该试纸条包括底板，底板上依次设有样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，检测线处包被有鼠抗猪SC蛋白单克隆抗体，检测线靠近样品垫一侧设置；质控线处包被有非洲猪瘟阳性血清的纯化蛋白，质控线靠近所述吸水垫一侧设置。本发明的样本稀释液含有量子点微球标记的重组多肽串联蛋白R10和重组蛋白P30V；R10和P30V的序列如SEQ ID NO:2和4所示。本发明试纸条配合样本稀释液，可用于非洲猪瘟病毒黏膜sIgA抗体的快速、高特异性、高灵敏度的定性检测。

技术领域

本发明属于兽医生物诊断制品技术领域，具体涉及一种检测非洲猪瘟病毒黏 膜sIgA抗体的量子点微球免疫层析试纸条及其应用。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus，ASFV)感染引起的家猪和野猪的一种急性、热性、高度接触性传染病， 是我国一类动物疫病，也是世界动物卫生组织(OIE)法定报告动物疫病。

ASFV是一种复杂的、有囊膜的、双股DNA病毒，直径170～190kb，具有 末端交联和反转重复区，其编码151-167种蛋白，成熟的病毒粒子包含有约50 多种结构蛋白。

ASFV主要经呼吸道和消化道途径侵入猪体，猪体应答感染，除了血清中产 生特异性的IgG抗体外，在呼吸道与消化道黏膜还可产生特异性的sIgA抗体。 sIgA抗体主要存在于呼吸道分泌液、唾液、泪液、乳汁、胃肠分泌液和泌尿生 殖道分泌液中，是机体黏膜免疫的主要抗体，也是病原体侵入后最先产生的免疫 反应，常用作疾病感染早期诊断的检测指标。

目前针对ASFV防控尚无有效的商品化疫苗，因此疫情防控的监测与诊断变 得至关重要。传统的诊断检测非洲猪瘟病毒抗体的方法有间接免疫荧光(IFA)、 和酶联免疫法(ELISA)。其中IFA的敏感性偏低，需要荧光操作人员和荧光显 微镜，成本高昂，限制了在现场快速检测中的应用。ELISA以抗原抗体特异性反 应为原理检测动物具有非洲猪瘟病毒抗体，具有灵敏度高，特异性强等优点，但 操作较为繁琐，耗时较长，加之需要酶标仪、恒温箱等设备，在基层养殖场难以 展开实时检测。

发明内容

针对现有问题的不足，本发明的第一个目的是提供一种检测非洲猪瘟病毒黏 膜sIgA抗体的量子点微球免疫层析试纸条，可用于非洲猪瘟病毒黏膜sIgA抗体的 快速、高特异性、高灵敏度的定性检测。

本发明的第二个目的是提供配合上述检测非洲猪瘟病毒黏膜sIgA抗体的量 子点微球免疫层析试纸条的样本稀释液。

本发明的第三个目的是提供一种以非诊断为目的的，采用所述量子点微球免 疫层析试纸条和所述样本稀释液检测非洲猪瘟病毒黏膜sIgA抗体的方法，该方法 操作简单，无需经过专业的培训，可以很好地胜任各种现场、基层实验室等环境 下的检测；结合较荧光显微镜和酶标仪价格更为低廉的荧光检测仪，可以及时的， 方便的，在现场得到结果。

本发明解决其技术问题采用的技术方案是：

一种检测非洲猪瘟病毒黏膜sIgA抗体的量子点微球免疫层析试纸条，包括 底板，所述底板上依次设有样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述硝酸纤维素膜 上设有检测线和质控线，所述检测线处包被有鼠抗猪SC蛋白单克隆抗体，所述 检测线靠近所述样品垫一侧设置；所述质控线处包被有非洲猪瘟阳性血清的纯化 蛋白，所述质控线靠近所述吸水垫一侧设置。

在本发明中，所述非洲猪瘟阳性血清的纯化蛋白是将兔抗非洲猪瘟重组蛋白P30V和重组多肽串联蛋白R10高免血清采用protein G纯化试剂盒纯化后所得蛋 白；所述鼠抗猪SC蛋白单克隆抗体是由分泌抗猪SC蛋白单克隆抗体的杂交瘤 细胞株4H11所制备，所述杂交瘤细胞株4H11的保藏号为：CCTCC NO：C201526。