[发明专利]一种检测非洲猪瘟病毒黏膜sIgA抗体的量子点微球免疫层析试纸条及其应用

权利要求书

1.一种检测非洲猪瘟病毒黏膜sIgA抗体的量子点微球免疫层析试纸条，其特征在于，包括底板，所述底板上依次设有样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线，所述检测线处包被有鼠抗猪SC蛋白单克隆抗体，所述检测线靠近所述样品垫一侧设置；所述质控线处包被有非洲猪瘟阳性血清的纯化蛋白，所述质控线靠近所述吸水垫一侧设置。

2.根据权利要求1所述量子点微球免疫层析试纸条，其特征在于所述非洲猪瘟阳性血清的纯化蛋白采用如下方法制备：将重组蛋白P30V和重组多肽串联蛋白R10免疫兔后所得非洲猪瘟阳性血清，采用protein G纯化试剂盒纯化，得到所述纯化蛋白；所述鼠抗猪SC蛋白单克隆抗体是由分泌抗猪SC蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株4H11所制备，所述杂交瘤细胞株4H11的保藏号为：CCTCC NO：C201526。

3.根据权利要求1或2所述量子点微球免疫层析试纸条，其特征在于：所述样品垫是将玻璃纤维膜采用含有牛血清白蛋白和Tween-20的Tris-HCl缓冲液浸泡处理后所得。

4.配合权利要求1-3之一所述试纸条使用的样本稀释液，其特征在于含有量子点微球标记的重组多肽串联蛋白R10和量子点微球标记的重组蛋白P30V；所述重组多肽串联蛋白R10的序列如SEQ ID NO:2；所述重组蛋白P30V的序列如SEQ ID NO:4所示。

5.根据权利要求4所述样本稀释液，其特征在于将量子点微球分别与重组多肽串联蛋白R10和重组蛋白P30V偶联，分别得到量子点微球标记的重组多肽串联蛋白R10和量子点微球标记的重组蛋白P30V；然后将量子点微球标记的重组多肽串联蛋白R10和重组蛋白P30V按照体积比为1：0.5-1.5混合，得到非洲猪瘟病毒双蛋白-标记物；将所述非洲猪瘟病毒双蛋白-标记物与含有BSA和Tween-20的PBS缓冲液按照体积比1:28-32混合，得到样本稀释液。

6.根据权利要求5所述样本稀释液，其特征在于所述量子点微球与重组多肽串联蛋白R10的质量比为5-7:1，所述量子点微球与重组蛋白P30V的质量比为5-7:1；所述PBS缓冲液含有质量百分浓度为0.05-0.15%的BSA和体积百分浓度为0.2%的Tween-20。

7.一种以非诊断为目的的采用权利要求1所述量子点微球免疫层析试纸条和权利要求5所述样本稀释液检测非洲猪瘟病毒黏膜sIgA抗体的方法，其特征在于将拭子样品加入样本稀释液中孵育后，滴加在所述试纸条的样品垫上，反应后，采用紫外光发射器检测C线和T线。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于检测样品为拭子样品或黏膜样品。

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于所述拭子样品包括口拭子、鼻拭子或肛拭子，所述黏膜样品为肺泡灌洗液。