[发明专利]一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对及其鉴别方法

说明书

本发明公开了一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对，包括鹿科动物鉴别引物对DcF‑DcR以及鹿茸鉴定引物对Rdfp‑Rdrp；本发明还提供一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对的鉴别方法，包括以下步骤：S1制备样品的保藏液；S2提取DNA；S3鹿科动物鉴别程序鉴别组织样品；S4过茸鹿鉴定程序鉴定后测序测定，判断鹿茸产品具体的种属；本发明的有益效果是：通过鹿科动物鉴别引物对和茸鹿鉴定引物对，实现鹿科动物和鹿茸产品的一体化准确鉴定；通过对鹿科动物基因组序列大数据分析，提高了鉴定鹿茸产品的准确性；通过先进行鹿科动物的检测，后采用茸鹿鉴定程序，实现准确鉴定；通过设定多组对照，同时切胶回收纯化鉴定后的产物，再测序分析，实现准确鉴定。

技术领域

本发明涉及鹿茸产品的检测和鉴定领域，具体是一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对及其鉴别方法。

背景技术

中国药典规定梅花鹿和马鹿的鹿茸是传统名贵药材。鹿茸在中药材市场流通的主要产品形式是切片和粉末，导致鹿茸难以用肉眼区分。另外，不同鹿种来源(如：梅花鹿、马鹿、赤鹿和驯鹿)的鹿茸价格差别很大，由于利润的驱使，大量的新西兰赤鹿、北美和北欧驯鹿茸从国外流入我国，仿冒传统中药的梅花鹿和马鹿鹿茸片(粉)。

为将商品流通的梅花鹿、马鹿、赤鹿和驯鹿茸片(粉)鉴别区分，急需对传统中药梅花鹿和马鹿鹿茸产品的真伪鉴别。现有的检测涉及到多聚酶链式反应时，大多采用线粒体DNA(mt DNA)为模板进行筛选，但是在真核生物长期进化中，线粒体序列经常被转移到核基因组中，极易出现核线粒体假序列NUMTs，而由于NUMTs在相近物种之间具有保守性，因此，通过线粒体DNA进行PCR扩增鉴定鹿茸产品时，NUMTs片段也很容易被直接扩增，由于NUMTs片段大小与线粒体的同源片段大小相差不大，极易出现假阳性，也就是说，相近物种的扩增片段不一定是目标片段，可能是NUMTs序列，而在鹿基因组中，CEP295NL以单拷贝基因存在，PCR扩增不能出现类似假阳性情况，因此根据CEP295NL基因靶标设计两对引物经PCR检测，通过PCR产物电泳条带及特征，在通过测序及序列能实现鉴别鹿科动物及鹿种。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供是一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对及其鉴别方法，以至少达到鹿科动物和鹿茸产品的一体化准确鉴定的目的。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对，包括鹿科动物鉴别引物对以及鹿茸鉴定引物对；所述的鹿科动物鉴别引物对为：

DcF 5’-ACGAGCGCCTTCCATGAAGACYGGT-3’(序列1)

DcR 5’-AGGTGGGCTTCCATCCCCGCTGAACTT-3’(序列2)；

对应的所述的茸鹿鉴定引物对为：

Rdfp 5’-CAGAGGCAAGCTCGTCTGGCTCAG-3’(序列3)

Rdrp 5’-GACTCTCACTTTTAACATATTTTCTGAAACTC-3’(序列4)。

优选的，为了进一步实现准确鉴定的目的，所述的鹿科动物鉴别引物对与鹿茸鉴定引物对均通过鹿科动物基因组序列大数据分析，以CEP295NL基因为靶标设计得到的；所述的大数据分析为，以不同鹿种之间存在不同保守程度的多个SNP位点为准进行筛选，确定CEP295NL基因在鹿基因组中以单拷贝基因状态存在；通过对鹿科动物基因组序列大数据分析，以不同保守程度的多个SNP位点进行筛选，从而筛选出单拷贝基因状态的CEP295NL基因，进而避免了线粒体DNA存在的假阳性的问题，提高了鉴定鹿茸产品的准确性。

本发明还提供一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对的鉴别方法，包括以下步骤：

S1将待检测的鹿茸组织样品用水清洗干净后，研磨成粉，再称取粉状样品，按比例与水混合后，于低温保藏，得到保藏液；