[发明专利]一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对及其鉴别方法

权利要求书

1.一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对，其特征在于：包括鹿科动物鉴别引物对以及鹿茸鉴定引物对；所述的鹿科动物鉴别引物对为：

DcF 5’-ACGAGCGCCTTCCATGAAGACYGGT-3’(序列1)

DcR 5’-AGGTGGGCTTCCATCCCCGCTGAACTT-3’(序列2)；

对应的所述的茸鹿鉴定引物对为：

Rdfp 5’-CAGAGGCAAGCTCGTCTGGCTCAG-3’(序列3)

Rdrp 5’-GACTCTCACTTTTAACATATTTTCTGAAACTC-3’(序列4)。

2.根据权利要求1所述的一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对，其特征在于：所述的鹿科动物鉴别引物对与鹿茸鉴定引物对，均通过鹿科动物基因组序列大数据分析，以CEP295NL基因为靶标设计得到的。

3.根据权利要求2所述的一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对及其鉴别方法，其特征在于：所述的大数据分析为，以不同鹿种之间存在不同保守程度的多个SNP位点为准进行筛选，确定CEP295NL基因在鹿基因组中以单拷贝基因状态存在。

4.根据权利要求1所述的一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对的鉴别方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1将待检测的鹿茸组织样品用水清洗干净后，研磨成粉，再称取粉状样品，按比例与水混合后，于低温保藏，得到保藏液；

S2将得到的保藏液反复冻融后，取冻融后悬液，以苯酚-氯仿法提取DNA或商品化液体样品DNA提取试剂，得到提取后的DNA；

S3将提取后的DNA先经过鹿科动物鉴别程序鉴别后，确定检测的组织样品是否来源于鹿科动物，得到确定的组织样品；

S4将确定的组织样品经过茸鹿鉴定程序鉴定后，再经过测序测定，即可判断鹿茸产品具体的种属。

5.根据权利要求4所述的一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对的鉴别方法，其特征在于：所述的鹿科动物鉴别程序为，将提取后的DNA，通过鹿科动物鉴别引物对进行鹿科动物的PCR反应，依据扩增的537bp特异条带的有和无判断其是否来源于鹿科动物，其中有特异条带判定为产品来源鹿科动物，无特异条带判定不是鹿科动物。

6.根据权利要求5所述的一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对的鉴别方法，其特征在于：所述的鹿科动物的PCR反应为：预变性95℃，5min；扩增反应：变性95℃，40s，退火63℃，30s，扩增72℃，40s，35个循环；延伸72℃，5min，冷却10℃，1min。

7.根据权利要求4所述的一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对的鉴别方法，其特征在于：所述的茸鹿鉴定程序为，将确定属于鹿科动物的确定组织样品，通过茸鹿鉴定引物对进行茸鹿引物的PCR反应，依据扩增的242bp特异条带的有和无判种属，其中有含有特异条带的多个条带的为赤鹿，仅单一特异条带的为梅花鹿或马鹿，无特异条带的为其他种属的鹿科动物。

8.根据权利要求7所述的一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对的鉴别方法，其特征在于：所述的茸鹿引物的PCR反应为，预变性95℃，5min；扩增反应：变性95℃，40s，退火58℃，20s；扩增72℃，40s，32个循环；延伸72℃，5min，冷却10℃，1min。

9.根据权利要求4所述的一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对的鉴别方法，其特征在于：所述的鹿科动物鉴别程序和茸鹿鉴定程序中，均设置阳性对照、阴性对照和空白对照，其中，用已知含鹿源性成分的样品作阳性对照，用已知不含鹿源性成分的样品作阴性对照，用等体积的双蒸水代替模板DNA作空白对照。

10.根据权利要求9所述的一种鹿茸产品的鹿种来源鉴别引物对的鉴别方法，其特征在于：所述的测序测定为，在所述的鹿科动物鉴别程序和茸鹿鉴定程序中，将待检测样品经过鉴别程序和鉴定程序后的特异条带，经过电泳后切胶回收纯化，纯化后的产物经过测序后，与所述的已知含鹿源性成分的样品的参考序列比较，即可判断鹿茸产品具体的种属。