[发明专利]促进凝结芽孢杆菌芽孢形成的方法及其微生态制剂与应用

权利要求书

1.一种促进凝结芽孢杆菌芽孢形成的方法，其特征在于，所述方法包括：（A）、制备种液：将凝结芽孢杆菌菌株接种于种液培养基中进行种液培养，随后灭活未形成芽孢的菌体，得到凝结芽孢杆菌种液；

所述步骤（A）凝结芽孢杆菌菌株接种于种液培养基中的接菌量为1~2%；

每1L种液培养基包括以下组分：蛋白胨8~10g，酵母浸粉3~5g，葡萄糖2~4g，氯化钠5~10g和磷酸氢二钾2~3g；

所述种液培养为摇瓶培养，所述摇瓶培养的反应条件为：摇瓶培养的温度为35~40℃、摇瓶培养的转速为150~250r/min，时间为60~68h，芽孢形成率大于90%；

（B）、菌体扩培：将步骤（A）得到的凝结芽孢杆菌种液接种于扩培培养基中，进行扩增培养，得到扩培发酵液；

所述步骤（B）凝结芽孢杆菌种液接种于扩培培养基的接菌量为0.5-1‰；

每1L扩培培养基中包含以下组分：蛋白胨3~5g、酵母浸粉2~4g、豆粕粉20~30g、玉米粉15~20g、麸皮20~25g、无水葡萄糖10~15g、浒苔粉5~8g、磷酸氢二钾2~3g、七水硫酸镁0.03~0.05g、一水合硫酸锰0.01~0.02g、中性蛋白酶0.3~0.5g、中温淀粉酶0.1~0.2g和纤维素酶0.2~0.3g；

所述扩培培养的反应条件为：所述扩培培养的温度为40~45℃、扩培培养的时间为20~22h、扩培培养的pH为5.2~7.0、扩培培养的搅拌速度为100~200 r/min、通气比为0.8-1.2（V/V·min）；

（C）、芽孢诱导：将诱导液加入扩培发酵液中，诱导培养，得到芽孢形成率为95~98%的凝结芽孢杆菌；

所述步骤（C）诱导液加入扩培发酵液的加入量为0.1~0.2‰；

所述诱导培养的反应条件为：所述诱导培养的温度为50~55℃、时间为6~8h、搅拌速度为120~150r/min、通气比为0.6-0.8（V/V·min）；

所述步骤（C）中还包括加入补料培养基的步骤；

所述补料培养基的加入量为3~5%；

每1L补料培养基中包含以下组分：轻质碳酸钙50~80g、一水合硫酸锰2.5~4.0g；

所述诱导液包括凝结芽孢杆菌孢子液。

2.根据权利要求1所述的促进凝结芽孢杆菌芽孢形成的方法，其特征在于，每1L种液培养基包括以下组分：蛋白胨9g，酵母浸粉4g，葡萄糖3g，氯化钠8g和磷酸氢二钾2g；

所述种液培养为摇瓶培养，所述摇瓶培养的反应条件为：摇瓶培养的温度为38℃、时间为65h，摇瓶培养的转速为200r/min，芽孢形成率大于90%；

所述灭活包括水浴灭活，所述水浴灭活的温度为80~90℃，时间为30~35min。

3.根据权利要求2所述的促进凝结芽孢杆菌芽孢形成的方法，其特征在于，所述水浴灭活的温度为85℃，时间为30min。

4.根据权利要求1所述的促进凝结芽孢杆菌芽孢形成的方法，其特征在于，每1L扩培培养基中包含以下组分：蛋白胨4g、酵母浸粉3g、豆粕粉25g、玉米粉18g、麸皮22g、无水葡萄糖12g、浒苔粉7g、磷酸氢二钾2g、七水硫酸镁0.04g、一水合硫酸锰0.02g、中性蛋白酶0.4g、中温淀粉酶0.2g和纤维素酶0.3g；

所述扩培培养基还包括消泡剂，所述扩培培养基中消泡剂的含量为0.3~0.5mL/L。

5.权利要求1-4任一项所述的促进凝结芽孢杆菌芽孢形成的方法在制备饲料产品中的应用。