[发明专利]雄激素受体剪接变异体-7核酸定量检测方法、内标及试剂盒

权利要求书

1.一种荧光PCR定量检测AR-V7的方法，其特征在于，包括：

S1、提供一包括AR-V7和已知浓度或模板量的AR-V7 QS内标的荧光PCR反应体系；

所述荧光PCR反应体系还包括用于检测AR-V7的上、下游引物及探针，以及用于检测AR-V7 QS的上、下游引物及探针，其中用于检测AR-V7的上、下游引物序列分别与用于检测AR-V7 QS的上、下游引物序列相同；

所述AR-V7 QS包括与所述AR-V7相同的上、下游引物识别序列，以及位于上、下游引物识别序列之间的探针识别序列Ⅰ；所述AR-V7包括位于上、下游引物识别序列之间的探针识别序列Ⅱ；

所述探针识别序列Ⅰ与所述探针识别序列Ⅱ的碱基组成相同而碱基排列顺序不同；

S2、进行扩增反应，并检测AR-V7和AR-V7 QS二者的Ct值，则所述样本中AR-V7的浓度或模板量采用如下的公式计算，

AR-V7浓度＝(2^ΔCт)×AR-V7 QS浓度，

AR-V7模板量＝(2^ΔCт)×AR-V7 QS模板量，

其中ΔCт为AR-V7 QS的Ct值与AR-V7的Ct值的差值。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述用于检测AR-V7 QS的探针序列与所述探针识别序列Ⅰ相同或互补，所述用于检测AR-V7的探针序列与所述探针识别序列Ⅱ相同或互补。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述用于检测AR-V7 QS的上、下游引物序列分别与AR-V7 QS的上、下游引物识别序列相同或互补，所述用于检测AR-V7的上、下游引物序列分别与AR-V7的上、下游引物识别序列相同或互补。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述探针识别序列Ⅰ与所述探针识别序列Ⅱ中至少4个碱基的排列顺序不同。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述AR-V7 QS在除所述探针识别序列Ⅰ之外的区域与所述AR-V7在除所述探针识别序列Ⅱ之外的区域序列相同。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

所述AR-V7 QS的序列为：

TTGTCCATCTTGTCGTCTTCGGAAATGTTGATAGCAAGAGGGTA

CTCTGGGAGAAAAATTCCGGGTTGGCAATTG，其中下划线部分为所述探针识别序列Ⅰ。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述用于检测AR-V7 QS的上、下游引物及探针分别为：

AR-V7 QS上游引物：TTGTCCATCTTGTCGTCTTCG

AR-V7 QS下游引物：CAATTGCCAACCCGGAATTT

AR-V7 QS探针：TGATAGCAAGAGGGTA。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述用于检测AR-V7的上、下游引物及探针分别为：

AR-V7上游引物：TTGTCCATCTTGTCGTCTTCG

AR-V7下游引物：CAATTGCCAACCCGGAATTT

AR-V7探针：TATGAAGCAGGGATGA。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在50uL的扩增反应体系中所述AR-V7 QS的模板量为50copies。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述AR-V7的浓度或模板量的范围是：在AR-V7 QS存在的情况下，所述AR-V7的浓度或模板量分别与AR-V7的Ct值线性相关的范围。

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，在50uL的扩增反应体系中，所述AR-V7的模板量在5copies到50000copies之间。