[发明专利]一种检测HER2基因扩增的试剂盒及方法

说明书

本发明的目的是提供一种基于数字微滴PCR技术检测HER2基因扩增的试剂盒及方法，以解决现有技术中HER2基因拷贝数变异判定方法准确度低的技术问题。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，基于数字微滴PCR方法检测HER2基因扩增，提供一种试剂盒及其方法。

背景技术

乳腺癌是严重威胁女性健康的恶行肿瘤，且发病率逐年上升。25％-30％的乳腺癌中有 HER2基因的扩增和蛋白的阳性表达，研究证实这部分患者OS和DFS较短，以HER2为 靶点的单克隆抗体药物赫赛汀(注射用曲妥珠单抗)现已广泛应用于临床，对乳腺癌的治 疗具有重要意义。

HER2又称为erbB2，是表皮生长因子(EGFR)家族成员之一，定位于染色体 17q12-21.32，编码185KDa的细胞受体，在肿瘤增殖、转移侵袭等方面发挥重要作用， HER2阳性的肿瘤患者对常规化疗及他莫昔芬内分泌治疗反应差，预后较差。

正确检测和评定乳腺癌的HER2蛋白表达和基因扩增状态对乳腺癌的临床治疗和预后 判断至关重要，HER2检测结果对患者临床决策起到指导作用。现行临床检测HER2推荐免疫组织化学法检测HER2蛋白表达水平，应用原位杂交法检测HER2基因扩增水平。原 位杂交法包括亮视野原位杂交法、银增强原位杂交法、荧光原位杂交法和组织原位荧光杂 交法。

数字微滴PCR(ddPCR)作为一种能对核酸进行绝对定量的方法，在肿瘤检测中广泛应用，由于其绝对定量的优势，在拷贝数变异即基因扩增检测方面具有良好的前景。

CEP17位于17p11.1-q11.1，与HER2基因定位于17号染色体临近位置，通常作为内参基因应用于HER2扩增检测中，但近年来有研究报道指出由于17号染色体着丝粒局灶性扩增导致参考基因CEP17异常扩增，HER2/CEP17作为评估HER2扩增的标准会导致一 定程度的假阴性，使一些患者失去接受进一步治疗的机会。因此，需要更精确的方法对现 有技术的检索方法进行矫正，以提高检测靶向率。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于数字微滴PCR技术检测HER2基因扩增的试剂盒及方法， 以解决现有技术中HER2基因拷贝数变异判定方法准确度低的技术问题。

为解决上述技术问题，本发明的提供一种检测HER2基因扩增的试剂盒，其包括：

检测HER2基因扩增的第一对引物对及检测探针1，其正向引物核苷酸序列如SeqID No.1所示，即：5’-GCCCCAGCGGTGTGAA-3’，其反向引物核苷酸序列如Seq ID No.2所示，即5’-CGCCCTCCTCATCTGGAAA-3’，检测探针1序列如Seq ID No.3所示，即5’-CCTGACCTCTCCTACATGCCCATCTGG-3’，所述检测探针1为VIC荧光基团标记；

检测HER2基因扩增的第二引物对及检测探针2，其正向引物核苷酸序列如Seq IDNo.4所示，即：5’-GGCATCTGCCTGACATCCA-3’，其反向引物核苷酸序列如Seq ID No.5 所示，即5’-GCGTCCGCGGTTTTCC-3’，检测探针2序列如Seq ID No.6所示，即5’-CCCTATGGCTGCCTCTTAGACCATGTCC-3’，所述检测探针2为VIC荧光基团标记；

检测EIF2C1基因扩增的引物对及检测探针3，其正向引物核苷酸序列如Seq IDNo.7 所示，即：5’-CACGGCAAGAGATCATTGAAGAC-3’，其反向引物核苷酸序列如Seq ID No.8所示，即5’-CGGGTGGACTTGTAGAATTGG-3’，检测探针3序列如Seq ID No.9所示，即5’ -TGTCCTACATGGTGCGTGAGCTCCTC-3’，所述检测探针3为VIC荧光基团标记；