[发明专利]一种检测HER2基因扩增的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测HER2基因扩增的试剂盒，其特征在于，其包括：

检测HER2基因扩增的第一对引物对及检测探针1，其正向引物核苷酸序列如Seq IDNo.1所示，即：5’-GCCCCAGCGGTGTGAA-3’，其反向引物核苷酸序列如Seq ID No.2所示，即5’-CGCCCTCCTCATCTGGAAA-3’，检测探针1序列如Seq ID No.3所示，即5’-CCTGACCTCTCCTACATGCCCATCTGG-3’，所述检测探针1为VIC荧光基团标记；

检测HER2基因扩增的第二引物对及检测探针2，其正向引物核苷酸序列如Seq ID No.4所示，即：5’-GGCATCTGCCTGACATCCA-3’，其反向引物核苷酸序列如Seq ID No.5所示，即5’-GCGTCCGCGGTTTTCC-3’，检测探针2序列如Seq ID No.6所示，即5’-CCCTATGGCTGCCTCTTAGACCATGTCC-3’，所述检测探针2为VIC荧光基团标记；

检测EIF2C1基因扩增的引物对及检测探针3，其正向引物核苷酸序列如Seq ID No.7所示，即：5’-CACGGCAAGAGATCATTGAAGAC-3’，其反向引物核苷酸序列如Seq ID No.8所示，即5’-CGGGTGGACTTGTAGAATTGG-3’，检测探针3序列如Seq ID No.9所示，即5’-TGTCCTACATGGTGCGTGAGCTCCTC-3’，所述检测探针3为VIC荧光基团标记；

检测TFF3基因扩增的引物对及检测探针4、5，其正向引物核苷酸序列如Seq ID No.10所示，即：5’-TTTGTCTGGGACAGCTGCAA-3’，其反向引物核苷酸序列如Seq ID No.11所示，即5’-GGGATCCTGGAGTCAAAGCA-3’，检测探针4和探针5序列如Seq ID No.12所示，即5’-CCCCATGTCACCCCCAAGGAGTG-3’，所述检测探针4为FAM荧光基团标记，所述检测探针5为VIC荧光基团标记；

检测CEP17基因扩增的引物对及检测探针6、7，其正向引物核苷酸序列如Seq ID No.13所示，即：5’-AGTTGTGCAGCAGTTAAATTTGCT-3’，其反向引物核苷酸序列如Seq ID No.14所示，即5’-ACAATGCTCAACACAAAAATCAAAC-3’，检测探针6和探针7序列如Seq ID No.15所示，即5’-CTTAGTTCTGAAAGGTTTC-3’，所述检测探针6为FAM荧光基团标记，所述检测探针7为VIC荧光基团标记。

2.根据权利要求1所述的检测HER2基因扩增的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR预混液，dNTP。

3.HER2基因扩增的非诊断目的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取待测样本中的DNA，

(2)以步骤(1)提取到的DNA作为模板，以权利要求1的基因特异性引物对以及检测探针进行扩增，

(3)扩增结束后，检测荧光信号并使用软件对扩增产物进行拷贝数统计，HER2基因的拷贝数为HER2基因的两组引物对扩增后拷贝数的平均值并简写标记为H、CEP17基因的拷贝数简写标记为C、EIF2C1基因的拷贝数简写标记为EI、TFF3基因的拷贝数简写标记为TF，分别计算H/C、TF/EI、C/TF、H/TF的比值；并使用如下公式计算：

HER2 copy＝(HER2-1 copy+HER2-2 copy)/2，

内参copy＝[1.04*(EIF2C1 copy)+0.99*(TFF3 copy)+0.97*(CEP17 copy)]/3，

HER2 copy/内参copy1.85HER2基因扩增，

1.7HER2 copy/内参copy1.85需结合其他实验判断如FISH、CISH、IHC，

HER2 copy/内参copy1.7HER2基因组拷贝数正常。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)同时进行阴性和阳性质控品的检测。