[发明专利]一种干细胞3D仿真培养用增殖培养基的制作方法

说明书

本发明提供一种干细胞3D仿真培养用的增殖培养基，无血清添加，组成成份明确，适合于干细胞3D仿真灌流培养，包括：无机盐、氨基酸、糖类、脂类、核苷类、维生素、细胞代谢物、细胞增殖因子、水，培养液的渗透压为270‑330 mOsmol/kg·H₂O，培养液的酸碱度pH7.2‑7.4。

技术领域

本发明属于医药领域，特别涉及一种3D仿真培养用增殖培养基的制作方法。

背景技术

胚胎干细胞是一种原始未分化的细胞，具有无限增殖能力与无限分化潜能，是当代医学进步与医疗提效的核心趋动力。间充质干细胞与成体干细胞是当前最热门的干细胞研究方向，具有取得容易、易于放大培养、分化能力强、可调控免疫的优点，因而在再生医学以及干细胞治疗方面取得较大进展并显示出巨大的市场应用潜力。

基于培养皿和培养瓶的2D培养技术为干细胞培养做出巨大贡献，完成了干细胞从人体向体外培养的技术过渡，当前正在向3D方向发展。由于2D培养技术是基于静止培养的扩增模式，造成2D培养获得的细胞进入人体后不适应人体的运动生理过程，干细胞产业向3D仿真培养技术过渡。由于当前市场上的培养基都是为基于培养皿和培养瓶的2D培养技术设计，缺少针对干细胞3D仿真培养的培养基。另外，许多干细胞培养基还使用成份不清楚的细胞裂解液（或细胞器裂解液），极个别还在使用动物血清成份，对于传染病的交叉感染预防和对于干细胞作用机制研究都有较大影响。

干细胞产业急需要组成清楚、无不明物质添加、使用效果好、价格便宜的3D仿真培养用增殖培养基。

发明内容

鉴于以上问题，本发明提供了一种干细胞3D仿真培养用增殖培养基的制作方法，以培养液的晶体渗透压和酸碱度为核心指标，有效保证生产制备的干细胞3D仿真培养用增殖培养基能够解决干细胞产业发展需要的干细胞3D仿真培养用增殖培养基难题。

为实现上述目标，本发明提供的一种干细胞3D仿真培养用增殖培养基的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1按配方中相应试剂的溶解特点与化学活性进行分组；

S2按分组进行相应试剂的计算、称量、溶解；

S3以直接水溶部分为主体，缓慢加入用酸或碱溶解的相应试剂浓缩液，避免析出；

S4接近定容体积时，利用碳酸氢钠与二氧化碳进行酸碱度调整，保证最终为pH7.4；

S5用3mol/L以上的氯化钠溶液调整渗透压，最终为300 mOsmol/kg·H₂O；

S6 定容后过滤除菌，无菌灌装，低温保存与运输。