[发明专利]一种干细胞3D仿真培养用增殖培养基的制作方法

权利要求书

1.一种干细胞3D仿真培养用增殖培养基的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1按配方中相应试剂的溶解特点与化学活性进行分组；

S2按分组进行相应试剂的计算、称量、溶解；

S3以直接水溶部分为主体，缓慢加入用酸或碱溶解的相应试剂浓缩液，避免析出；

S4接近定容体积时，利用碳酸氢钠与二氧化碳进行酸碱度调整，保证最终为pH7.4;

S5用3mol/L以上的氯化钠溶液调整渗透压，最终为300 mOsmol/kg·H₂O;

S6 定容后过滤除菌，无菌灌装，低温保存与运输。

2.如权利要求1所述的干细胞3D仿真培养用增殖培养基，其特征在于，包括：无机盐、氨基酸、糖类、脂类、核苷类、维生素、干细胞代谢物、干细胞增殖因子、水，组成成份完全已知，不使用血清；其中，无机盐由多种阳离子与多种阴离子组成，包括细胞生长增殖需要的钾、钠、钙、镁、铁等阳离子，包括碳酸氢根、硫酸根、磷酸根和氯离子等阴离子，其中，钾离子0.01%-0.03%、钠离子0.2%-0.6%、钙离子0.003%-0.02%、镁离子0.0002%-0.001%、铁离子0.00005%-0.0002%，碳酸氢根离子0.1%-0.5%、硫酸根离子0.0005%-0.005%、磷酸根离子0.005%-0.05%、氯离子0.4%-0.6%；氨基酸包括丙氨酸0.0005%-0.01%、精氨酸0.0005%-0.03%、天冬酰胺0.0005%-0.01%、天冬氨酸0.0005%-0.01%、半胱氨酸0.0005%-0.01%、谷氨酰胺0.0005%-0.1%、谷氨酸0.0005%-0.01%、甘氨酸0.0005%-0.01%、组氨酸0.0005%-0.01%、异亮氨酸0.0005%-0.01%、亮氨酸0.0005%-0.01%、赖氨酸0.0005%-0.01%、甲硫氨酸0.0005%-0.01%、苯丙氨酸0.0005%-0.01%、脯氨酸0.0005%-0.01%、丝氨酸0.0005%-0.01%、苏氨酸0.0005%-0.01%、色氨酸0.0005%-0.01%、酪氨酸0.0005%-0.01%、缬氨酸0.0005%-0.01%；糖类包括葡萄糖并以丙酮酸钠进行辅助，其中，葡萄糖0.005%-0.5%、丙酮酸钠0.005%-0.05%；脂类包括卵磷脂、胆固醇、脂肪酸，其中，卵磷脂0.05%-0.5%、胆固醇0.05%-0.5%、软脂酸0-0.2%、硬脂酸0-0.2%、油酸0-0.2%、亚油酸0-0.2%、亚麻酸0-0.2%、花生四烯酸0-0.2%、EPA 0-0.2%、DHA 0-0.2%；核苷包括核糖核苷和脱氧核糖核苷，其中，腺嘌呤核苷0.0002%-0.005%、鸟嘌呤核苷0.0002%-0.005%、胞嘧啶核苷0.0002%-0.005%、尿嘧啶核苷0.0002%-0.005%、肌苷0.0002%-0.005%、黄嘌呤核 苷0.0002%-0.005%、腺嘌呤脱氧核苷0.0002%-0.005%、鸟嘌呤脱氧核苷0.0002%-0.005%、胞嘧啶脱氧核苷0.0002%-0.005%、胸腺嘧啶脱氧核苷0.0002%-0.005%；维生素包括0.00002%-0.005%维生素C、0.000002%-0.00002%生物素、0.00002%-0.0005%右旋泛酸钙、 0.00002%-0.0005%氯化胆碱、0.00002%-0.0005%叶酸、0.00002%-0.0005%肌醇、0.00002%-0.0005%烟酰胺、0.00002%-0.0005%盐酸吡哆醇、0.000002%-0.00002%核黄素、0.00002%-0.0005%盐酸硫胺素、0.00002%-0.0005%维生素B12；干细胞增殖的中间代谢物包括，0.00002%-0.001%尿酸、0.002%-0.05%尿素、0.002%-0.05%次黄嘌呤、0.002%-0.05%黄嘌呤；干细胞增殖因子包括表皮生长因子和血小板衍生生长因子，其中每百万干细胞的用量是0.1ng-2ng的表皮生长因子、0.3ng-6ng的血小板衍生生长因子。

3.如权利要求1所述的干细胞3D仿真培养用增殖培养基制作方法，其特征在于，以培养液的晶体渗透压和酸碱度为产品核心控制指标。