[发明专利]一种CS毛细管电泳分析方法和应用

说明书

本发明属于毛细管电泳检测技术领域，本发明涉及一种CS毛细管电泳分析方法和应用，将CS利用离线富集方法进行富集，然后利用场放大结合大体积电动进样堆积的方法进行在线富集；CS水溶液与季铵盐类阳离子型表面活性剂溶液混合，然后加入硫酸溶液，弃上清，向沉淀中加入NaCl，醇沉，分离沉淀和上清液，CS经多次醇沉，将CS沉淀合并后用超纯水溶解得到富集液。将离线富集后的富集液配制得到CS碱溶液，进行大体积电动进样，BGE为20mmol/LNaH₂PO₄‑90mmol/L EDA‑磷酸缓冲液，BGE中加入NaCl，pH3.0。可以对大分子物质CS进行准确的检测，富集效果较好。

技术领域

本发明属于毛细管电泳检测技术领域，具体涉及一种CS毛细管电泳分析方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate，CS)是一种普遍存在于动物软骨、结缔组织中的糖胺聚糖，糖结构与组成复杂多样。硫酸软骨素在食品添加剂领域和化妆品领域具有一定的应用。

毛细管电泳(Capillary Electrophoresis，简称CE)。毛细管电泳是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。CE的基本仪器装置由毛细管、缓冲液槽、进样系统、高压电源和检测器组成。

发明人发现现有的利用毛细管电泳分析的方法检测CS的过程中，由于CS的分子量较大、缺少紫外生色团，导致使用毛细管电泳分析的方法进行紫外检测时检测灵敏度较低。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种CS毛细管电泳分析方法和应用。

为了解决以上技术问题，本发明的技术方案为：

第一方面，一种CS毛细管电泳分析方法，将CS利用离线富集方法进行富集，然后利用场放大结合大体积电动进样堆积的方法进行在线富集；

离线富集方法为：CS水溶液与季铵盐类阳离子型表面活性剂溶液混合，然后加入硫酸溶液，弃上清，向沉淀中加入NaCl溶液，醇沉，分离沉淀和上清液，CS经醇沉，合并CS沉淀并用超纯水溶解得到富集液。

将离线富集后的富集液配制得到CS碱溶液，在线富集采用场放大结合大体积电动进样的方法，BGE为20mmol/LNaH₂PO₄-90mmol/L EDA-NaCl-磷酸缓冲液，pH3.0。

由于CS的分子量较大、酸性较弱，导致动态pH调制堆积和胶束扫集技术的富集效果不明显。

在线富集方法中：向BGE(毛细管中的缓冲溶液)为20mmol/L NaH₂PO₄-90mmol/LEDA-磷酸(pH 3.0)缓冲溶液加入一定浓度的NaCl溶液，可使BGE的导电性提高，CS样品在移动到样品区带与BGE交界处时电场强度下降，从而使迁移速度变慢达到富集效果。

离线富集方法中：利用CS是聚阴离子的特性，CS与季铵盐类阳离子型表面活性剂反应形成稳定的缔合物微粒，通过大体积萃取可实现离线富集。

离线富集和在线富集结合进行富集的方法，相比于常规进样方法，富集倍数为130倍，常规分析方法为：BGE中没有加入NaCl，进样压力为0.5psi，进样时间为10s。

通过对大堆积进样法、场放大结合大体积压力进样堆积法或场放大结合大体积电动进样堆积法进行研究，选择场放大结合大体积电动进样堆积法，实现提高检测的灵敏度。