[发明专利]一种CS毛细管电泳分析方法和应用

权利要求书

1.一种CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：将CS利用离线富集方法进行富集，然后利用场放大结合大体积电动进样堆积的方法进行进样；

离线富集方法为：CS水溶液与季铵盐类阳离子型表面活性剂溶液混合，然后加入硫酸溶液，弃上清，向沉淀中加入NaCl，醇沉，分离沉淀和上清液，CS经醇沉后，将CS沉淀合并并用超纯水溶解得到富集液。

将离线富集后的富集液配制得到CS碱溶液，在线富集采用场放大结合大体积电动进样的方法，BGE为20mmol/LNaH₂PO₄-90mmol/L EDA-NaCl-磷酸缓冲液，pH3.0。

2.如权利要求1所述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：电动进样中，BGE中的NaCl的浓度为10-30mmol/L；优选为10-20mmol/L。

3.如权利要求1所述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：场放大结合大体积电动进样堆积中，进样时间为60-420s；优选的，进样时间为300-420s。

4.如权利要求1所述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：场放大结合大体积电动进样堆积中，碱浓度为27-108mmol/L；优选的，碱浓度为27-54mmol/L。

5.如权利要求1所述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：季铵盐类阳离子型表面活性剂为氯化十六烷基吡啶，溴化十六烷基吡啶，十六烷基三甲基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵；优选为十六烷基三甲基氯化铵。

6.如权利要求1述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：离线富集方法中，CTAC溶液的浓度为4g/mL，CTAC溶液与CS水溶液的体积比为1-1.5:10。

7.如权利要求1述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：硫酸溶液为98％硫酸和水的溶液，98％硫酸和水的体积比为1:9，CS水溶液与硫酸溶液的体积比为4-6:1；优选5:1。

8.如权利要求1所述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：离线富集方法中，NaCl溶液的浓度为4-6mol/L，CS水溶液与NaCl溶液的体积比为9-11:1；优选的，体积比为10:1，NaCl溶液的浓度为5mol/L；

或，醇沉中使用的乙醇与样品的体积比为5-10:1；优选为8-10:1；进一步优选为8:1；

或，醇沉的次数为1-5次；优选为2-5次；

或，在线富集的电动进样的进样电压为-8～-12Kv；优选为-10Kv；

或，电泳条件为：检测波长200nm，电泳温度20-30℃，分离电压-10～-20Kv；优选的，电泳条件为：电泳温度25℃，分离电压-15Kv。

9.如权利要求8所述的CS毛细管电泳分析方法，其特征在于：毛细管使用前先用0.1mol/L的NaOH进行活化，于20psi压力下冲洗，然后依次用超纯水、BGE于20psi压力下依次冲洗，最后在毛细管两端加高压运行，高压的电压值为20kV，BGE为20mmol/LNaH₂PO₄-90mmol/L EDA-NaCl-磷酸缓冲液，pH 3.0。

10.如权利要求1-9任一所述的CS毛细管电泳分析方法在硫酸软骨素检测中的应用。