[发明专利]一种基于LAMP技术的小条实蝇属FARQ复合体的鉴定方法及其专用引物组

说明书

本发明公开了一种基于LAMP技术的小条实蝇属FARQ复合体的鉴定方法及其专用引物组。所述专用引物组由引物1‑引物4组成；所述引物1为序列表中序列1所示的单链DNA分子；所述引物2为序列表中序列2所示的单链DNA分子；所述引物3为序列表中序列3所示的单链DNA分子；所述引物4为序列表中序列4所示的单链DNA分子。本发明的专用引物组特异性好、检测时间短，对小条蝇属FARQ复合体中的任一种实蝇均能有效检测，且检测方法具有不依赖贵重仪器、准确、快速、适用范围广等优点，对小条蝇属FARQ复合体快速检测具有指导意义，为小条蝇属FARQ复合体快速检测提供了有力的工具。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于LAMP技术的小条实蝇属FARQ复合体的鉴定方法及其专用引物组。

背景技术

实蝇属双翅目实蝇科，在全世界广泛分布，约有500属4,500种，其中具有经济意义的实蝇有26属223种。实蝇的寄主范围广泛，在为害水果、蔬菜等经济作物的同时，也严重影响果蔬的对外贸易，造成贸易壁垒，导致巨大的经济损失。小条实蝇属Ceratitis FARQ复合体隶属于实蝇科Tephritidae，小条实蝇属Ceratitis，Pterandrus亚属，由腹斑小条实蝇Ceratitis fasciventris、番荔枝实蝇Ceratitis anonae、纳塔尔实蝇Ceratitis rosa和瞿氏小条实蝇Ceratitis quilicii组成，其中纳塔尔实蝇Ceratitis rosa可为害25科90余种作物，是该复合体中破坏性最强的实蝇。该复合体起源于非洲大陆，其中纳塔尔实蝇Ceratitis rosa和瞿氏小条实蝇Ceratitis quilicii已经入侵至印度洋的毛里求斯和留尼旺，且北美洲、南美洲及东南亚均是其高度适生区。在我国，该复合体也经常在口岸被截获，其检疫鉴定特别是快速鉴定的需求愈发迫切。

传统的实蝇鉴定工作主要依靠形态学特征，但实蝇种类多，区分不同实蝇种类之间的形态学差别往往非常细微和复杂，这些问题的存在都给实蝇传统形态鉴定带来了极大的阻碍。利用分子生物学技术进行实蝇种类鉴定，主要包括DNA条形码技术、PCR技术、限制性片段长度多态性技术以及基因芯片技术，但需昂贵的仪器设备，鉴定成本高，不适于在基层部门中推广应用。

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)针对靶基因上的6个特异区域设计4-6条特殊引物，采用具有强链置换活性的Bst DNA聚合酶，在恒温条件下(60-65℃)反应约30-60min，即可完成核酸的大量扩增，产生大量不同长度的茎环结构DNA片段。LAMP是一种简便高效的核酸恒温扩增技术，可以在短时间内大量扩增反应产物，快速高效、灵敏度高，且操作简便，无需特殊仪器，检测结果可通过显色反应肉眼观察判断，更具应用推广前景。

发明内容

本发明的目的是提供基于LAMP技术的小条实蝇属FARQ复合体的鉴定方法及其专用引物组。

第一方面，本发明保护用于检测或辅助检测小条蝇属FARQ复合体的成套引物组。

本发明提供的用于检测或辅助检测小条蝇属FARQ复合体的成套引物组由引物1-引物4组成；

所述引物1为如下a1)或a2)：

a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；

a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物2为如下a3)或a4)：

a3)序列表中序列2所示的单链DNA分子；

a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物3为如下a5)或a6)：

a5)序列表中序列3所示的单链DNA分子；