[发明专利]一种吖啶酯抗体标记方法及其应用

说明书

本发明公开了一种吖啶酯抗体标记方法及其应用；所述方法为：1)量取标记缓冲溶液于离心管中；2)加入髓过氧化物酶检测抗体，充分混匀；3)加入吖啶酯溶液，充分混匀，室温避光震荡反应；4)加入适量封闭液，室温避光振荡反应；5)加入适量的标记缓冲液定量，2～8℃密封保存。该方法可以得到灵敏度更高、线性范围广、也便于实现自动化的MPO检查产品。

技术领域

本发明涉及生物技术检测领域，具体涉及一种化学发光法检测试剂盒制备过程中吖啶酯抗体标记的方法。

背景技术

心血管疾病是我国慢性病之首，其死亡占疾病死亡构成40％以上，高居首位，致残率也近40％，严重威胁个人的生命健康，给家庭、社会带来巨大的经济负担和精神痛苦。而且，近年来该病的年轻化趋势越来越明显，三四十岁心源性猝死的情况屡见不鲜。如此高的致死、致残率主要是因其发病急、进展快，很多患者无法得到及时有效的救治。因此，早发现、早治疗是避免严重不良后果发生的有力措施。

大量临床研究资料表明，髓过氧化物酶(MPO)水平在不良心血管事件发生前的几个月就有明显升高，且其含量水平与冠脉病变具有显著相关性，监测血液中MPO水平可以评估表征健康人群发生CAD、以及ACS患者复发心血管意外事件的风险，其漏诊率只有 9.3％，对于风险人群或轻微症状人群检测MPO有利于急重症的及时发现，从而使避免恶性事件发生成为可能。但目前MPO的检查方法多为酶联免疫、比浊法及胶体金法，由于方法学的限制，检测的灵敏度、稳定性、线性范围等都难以满足临床的需求，影响MPO 在及时诊断尽早治疗方面作用的发挥。

因此，急需一种检测方便快捷的同时，结果更加准确的MPO检测手段，如化学发光法。化学发光(ChemiLuminescence，简称为CL)法是分子发光光谱分析法中的一类，它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。化学发光分析法具有灵敏度高、设备简单、操作方便、线性范围广、分析快、也便于实现自动化等优点。吖啶酯是化学发光法常用的发光剂，吖啶酯标记抗体的工艺直接影响发光效率，即影响检测结果的灵敏度及准确性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种化学发光法检测髓过氧化物酶时吖啶酯的抗体标记方法，以实现效率更高、结果更准确的MPO检测。具体技术方案如下：

本发明所述吖啶酯抗体标记的方法，包括以下步骤：

1)量取标记缓冲溶液于离心管中；

2)加入髓过氧化物酶检测抗体，充分混匀；

3)加入吖啶酯溶液，充分混匀，室温避光震荡反应；

4)加入适量封闭液，室温避光振荡反应；

5)加入适量的标记缓冲液定量，2～8℃密封保存。

上述步骤1)的缓冲溶液为PB缓冲液(磷酸缓冲液)。该环节可用缓冲液比较多，如PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液)、CB缓冲液(碳酸盐缓冲液)等，不同的缓冲液体系及其浓度和pH都会影响吖啶酯的反光强度。本发明的标记缓冲液优选为0.1mol/L，pH7.6 的PB缓冲液。步骤5)的缓冲液同步骤1)。

本发明所述方法的吖啶酯与髓过氧化物酶抗体加入量的比值为2:(4-6)，该比值为重量比。实现对不同抗体的检测，吖啶酯与抗体的用量比差异非常大，不适当的配比会出现发光信号弱或非特异性结合等情况，导致检测灵敏度低或结果不准确。所以针对 MPO抗体的检测，吖啶酯与抗体用量关系是需要付出创造性劳动获得的。

在一优选实施例中，本发明所述吖啶酯与髓过氧化物酶抗体加入量的比值为2:5。