[发明专利]制备CRX突变相关视网膜病变非人哺乳动物模型的方法

说明书

本发明涉及分子生物学与生物医学领域，具体而言，涉及一种制备CRX突变相关视网膜病变非人哺乳动物模型的方法。该方法包括采用转基因方法使得所述动物的视网膜感光细胞中表达CRX^[S204fs]蛋白的步骤。由于CRX^[S204fs]蛋白对野生型蛋白具有竞争拮抗作用(Ⅲ类突变)，因而只要在动物体内表达CRX^[S204fs]蛋白即可表现出视网膜病变症状，从而不需要敲除野生型的CRX基因，使得动物模型的构建更加简单、快速、经济。

技术领域

本发明涉及分子生物学与生物医学领域，具体而言，涉及一种制备CRX突变相关视网膜病变非人哺乳动物模型的方法。

背景技术

锥-杆细胞同源盒基因(cone-rod homeobox，CRX)编码感光细胞特异性转录因子，可转录激活视紫红质、视黄醇结合蛋白等多种感光细胞特异性基因，对视锥、视杆细胞的分化发育和完整性具有至关重要的作用。CRX是遗传性视网膜病变常见的致病基因，其突变可引起多种疾病，包括如Leber氏先天性黑朦，视锥视杆细胞营养不良(cone-rod dystrophy，CoRD)，视锥细胞营养不良，视网膜色素变性和黄斑营养不良。大约三分之一的CRX致病性突变会导致CORD，其特征是进行性视锥细胞功能障碍，主要表现为中心视力丧失，色觉异常和视神经功能减退。随着疾病进展逐渐累及视杆细胞，出现夜盲、周边视野缺损等症状。发明人明确了一个由CRX基因c.611delC(p.S204fs)突变引起的常染色体显性视锥视杆细胞营养不良家系。

CRX突变引起视网膜病变的致病机制尚未阐明。目前，CRX突变根据位点、突变类型和分子功能可分为四类。已有文献通过体内外实验探究CRX不同突变类型的致病机理。体外实验由于无法模拟体内的转录调控网络而受到限制。体内实验主要包括携带CRX突变的转基因动物模型，例如CRX^E168d2小鼠和CRX^Rdy家猫代表Ⅲ类突变，CRX^R90W小鼠代表Ⅰ类突变。但是，建立携带特定致病性突变位点的动物模型成本高昂、技术难度大，不能应用于所有突变位点。

发明内容

本发明的目的是针对现有CRX突变相关视网膜病变动物模型的局限性，提供一种在非人哺乳动物中建立诱导周期短、诱发率高、操作简单方便、技术难度小的CRX突变相关视网膜病变动物模型的方法。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

制备CRX突变相关视网膜病变非人哺乳动物模型的方法，其包括采用转基因方法使得所述动物的视网膜感光细胞中表达CRX^[S204fs]蛋白的步骤。

可选的，如上所述的方法，所述转基因方法包括将含有c.611delC突变的CRX基因转染到所述动物的视网膜感光细胞。

可选的，如上所述的方法，所述突变的CRX基因被连接于载体中，通过所述载体转染到所述动物的视网膜感光细胞。

可选的，如上所述的方法，所述CRX基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

可选的，如上所述的方法，所述载体为AAV载体。

可选的，如上所述的方法，所述载体含有编码报告基因和/或标签蛋白的核苷酸。

可选的，如上所述的方法，所述载体通过视网膜下腔注射以将所述突变的CRX基因转染到所述动物的视网膜感光细胞。

可选的，如上所述的方法，所述动物为啮齿类动物。

可选的，如上所述的方法，所述动物是小鼠(Mus musculus)。

根据本发明的再一方面，本发明还涉及如上所述方法得到的动物在鉴别和/或测试药物中的用途；